یونیورسال SYBR GREEN qPCR Premix (آبی)

شماره گربه: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) یک محلول اولیه برای تقویت کمی PCR 2× زمان واقعی است که با حساسیت و ویژگی بالا مشخص می شود، به رنگ آبی است و دارای اثر ردیابی اضافه نمونه است.جزء اصلی Taq DNA پلیمراز از شروع داغ آنتی بادی برای مهار موثر تقویت غیر اختصاصی به دلیل بازپخت پرایمر در طول آماده سازی نمونه استفاده می کند.در عین حال، فرمول فاکتورهای محرک را برای بهبود راندمان تقویت واکنش PCR و یکسان سازی تقویت ژن ها با محتوای GC مختلف (30 تا 70٪) اضافه می کند، به طوری که PCR کمی می تواند یک رابطه خطی خوب را در یک کمی گسترده به دست آورد. منطقهاین محصول حاوی رنگ مرجع غیر فعال ROX است که برای اکثر ابزارهای qPCR قابل استفاده است.نیازی به تنظیم غلظت ROX در ابزارهای مختلف نیست.برای آماده سازی سیستم واکنش برای تقویت فقط لازم است پرایمرها و قالب ها اضافه شوند.

اجزاء

یونیورسال آبی qPCR Master Mix

شرایط نگهداری

این محصول با بسته های یخ ارسال می شود و می توان آن را به مدت 18 ماه در دمای -25-~-15 درجه سانتیگراد نگهداری کرد.هنگام ذخیره یا آماده سازی سیستم واکنش، لازم است از تابش نور شدید اجتناب شود.

مشخصات

دستورالعمل ها

1. سیستم واکنش

[توجه]: قبل از استفاده کاملاً مخلوط کنید تا از ایجاد حباب بیش از حد در اثر تکان دادن شدید جلوگیری شود.

الف) غلظت پرایمر: غلظت نهایی پرایمر 0.2μmol/L است و همچنین می تواند در صورت لزوم بین 0.1 و 1.0μmol/L تنظیم شود.

ب) غلظت الگو: اگر الگو محلول ذخیره cDNA رقیق نشده باشد، حجم مورد استفاده نباید از 1/10 حجم کل واکنش qPCR تجاوز کند.

ج) رقیق سازی الگو: توصیه می شود محلول ذخیره cDNA 10-5 برابر رقیق شود.مقدار بهینه قالب اضافه شده زمانی بهتر است که مقدار Ct بدست آمده توسط تقویت 20-30 سیکل باشد.

د) سیستم واکنش: توصیه می شود از 20μL یا 50μL برای اطمینان از اثربخشی و تکرارپذیری تکثیر ژن هدف استفاده شود.

ه) آماده سازی سیستم: لطفاً در نیمکت فوق العاده تمیز آماده شده و از نوک ها و لوله های واکنش بدون باقیمانده هسته استفاده کنید.توصیه می شود از نکات با کارتریج های فیلتر استفاده کنید.از آلودگی متقابل و آلودگی آئروسل خودداری کنید.

2.برنامه واکنش

برنامه استاندارد

برنامه سریع

[توجه]: برنامه سریع برای اکثریت قریب به اتفاق ژن ها مناسب است و برنامه های استاندارد را می توان برای ژن های ساختار ثانویه پیچیده جداگانه امتحان کرد.

الف) دما و زمان بازپخت: لطفاً با توجه به طول پرایمر و ژن هدف تنظیم کنید.

ب) دریافت سیگنال فلورسانس (★): لطفاً رویه آزمایشی را مطابق با الزامات دستورالعمل استفاده از دستگاه تنظیم کنید.

ج) منحنی ذوب: برنامه پیش فرض ابزار را می توان به طور معمول استفاده کرد.

3. تجزیه و تحلیل نتایج 

حداقل سه تکرار بیولوژیکی برای آزمایش‌های کمی مورد نیاز بود.پس از واکنش، منحنی تقویت و منحنی ذوب باید تایید شود.

3.1 منحنی تقویت:

منحنی تقویت استاندارد S شکل است.تجزیه و تحلیل کمی دقیق ترین زمانی است که مقدار Ct بین 20 و 30 باشد. اگر مقدار Ct کمتر از 10 باشد، لازم است الگو رقیق شده و دوباره آزمایش انجام شود.هنگامی که مقدار Ct بین 30-35 است، لازم است غلظت قالب یا حجم سیستم واکنش افزایش یابد تا بازده تقویت بهبود یابد و از دقت تجزیه و تحلیل نتیجه اطمینان حاصل شود.هنگامی که مقدار Ct بیشتر از 35 باشد، نتایج آزمایش نمی تواند بیان ژن را به صورت کمی تجزیه و تحلیل کند، اما می تواند برای تجزیه و تحلیل کیفی استفاده شود.

3.2 منحنی ذوب:

پیک منفرد منحنی ذوب نشان می دهد که ویژگی واکنش خوب است و می توان تجزیه و تحلیل کمی را انجام داد.اگر منحنی ذوب پیک های دو یا چندگانه را نشان دهد، تجزیه و تحلیل کمی نمی تواند انجام شود.منحنی ذوب پیک های دوگانه را نشان می دهد و لازم است قضاوت کنیم که آیا پیک غیرهدف دایمر پرایمر است یا تقویت غیر اختصاصی با الکتروفورز ژل DNA آگارز.اگر دایمر پرایمر است، توصیه می شود غلظت پرایمر را کاهش دهید یا پرایمرهایی با راندمان تقویت بالا طراحی مجدد کنید.اگر تقویت غیر اختصاصی است، لطفاً دمای بازپخت را افزایش دهید یا پرایمرها را با ویژگی بازطراحی کنید.

یادداشت

لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، PPE لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!

این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است!