Rnase A
ریبونوکلئاز A (RNaseA) یک پلی پپتید تک رشته ای حاوی 4 پیوند دی سولفیدی با وزن مولکولی حدود 13.7 کیلو دالتون است.RNase A یک اندوریبونوکلئاز است که به طور خاص RNA تک رشته ای را در باقیمانده های C و U تجزیه می کند.به طور خاص، برش، پیوند فسفودی استری تشکیل شده توسط 5'-ریبوز یک نوکلئوتید و گروه فسفات روی 3'-ریبوز نوکلئوتید پیریمیدین مجاور را تشخیص می دهد، به طوری که فسفات های 2، 3'-حلقه ای به 33 مربوطه هیدرولیز می شوند. فسفات‌های نوکلئوزیدی (مثلاً pG-pG-pC-pA-pG توسط RNase A برای تولید pG-pG-pCp و A-PG شکسته می‌شود).RNase A فعال ترین در برش RNA تک رشته ای است.غلظت کاری توصیه شده 1-100μG/mL است که با سیستم های واکنش مختلف سازگار است.غلظت کم نمک (0-100 میلی مولار NaCl) را می توان برای برش زنجیره های RNA تک رشته ای، RNA دو رشته ای و RNA تشکیل شده توسط هیبریداسیون RNA-DNA استفاده کرد.با این حال، در غلظت نمک بالا (≥0.3 M)، RNase A فقط به طور خاص RNA تک رشته ای را می شکافد.
RNase A معمولاً برای حذف RNA در طول تهیه DNA پلاسمید یا DNA ژنومی استفاده می شود. اینکه DNase در طول فرآیند آماده سازی فعال باشد یا نه، می تواند به راحتی بر واکنش تأثیر بگذارد.از روش سنتی جوشاندن در حمام آب می توان برای غیرفعال کردن فعالیت DNase استفاده کرد.این محصول حاوی DNase و پروتئاز نیست و قبل از استفاده نیازی به عملیات حرارتی ندارد.علاوه بر این، این محصول می تواند در آزمایشات زیست شناسی مولکولی مانند آنالیز حفاظت RNase و تجزیه و تحلیل توالی RNA نیز استفاده شود.
شرایط نگهداری
این محصول را می توان در دمای -25 تا 15 درجه سانتیگراد نگهداری کرد و به مدت 2 سال اعتبار دارد.
دستورالعمل ها
این یکی از روش های رایج برای تهیه محلول ذخیره سازی RNase A است.همچنین می توان آن را تهیه کردسایر روش ها مطابق روش های سنتی در ادبیات آزمایشگاهی یا مرجع (مانندحل شدن مستقیم در 10 میلی مولار Tris-HCl، pH 7.5 یا محلول Tris-NaCl)
1. از 10 میلی مولار استات سدیم (pH 5.2) برای تهیه 10 میلی گرم بر میلی لیتر محلول ذخیره سازی RNase A استفاده کنید.
2. حرارت دادن در 100 ℃ به مدت 15 دقیقه
3. تا دمای اتاق خنک شود، 1/10 حجم 1 مولار Tris-HCl (pH 7.4) اضافه کنید، pH آن را روی 7.4 تنظیم کنید (برایبه عنوان مثال، 500 میلی لیتر محلول ذخیره سازی RNase 10 گرم در میلی لیتر 1M Tris-HCL، PH7.4 اضافه کنید)
4. بسته بندی فرعی در -20 ℃ برای ذخیره سازی یخ زده، که می تواند تا 2 سال پایدار باشد.
[یادداشت]: هنگام جوشاندن محلول RNaseA در شرایط خنثی، رسوب RNase تشکیل می شود.آن را با PH پایین تر بجوشانید و در صورت وجود بارش می توان مشاهده کرد که ممکن است به دلیل وجود ناخالصی های پروتئینی باشد.اگر پس از جوشاندن رسوب پیدا شد، ناخالصی ها را می توان با سانتریفیوژ با سرعت بالا (13000rpm) حذف کرد و سپس برای ذخیره سازی در انجماد آن را بسته بندی کرد.
اطلاعات محصول
| مترادف ها | ریبونوکلئاز I;ریبونوکلئاز پانکراس؛ریبونوکلئاز 3'-پیریمیدنوولیگونوکلئوتیدوهیدرولاز؛Rnase A;اندوریبونولساز I |
| شماره CAS | 9001-99-4 |
| ظاهر | پودر لیوفیلیزه سفید |
| وزن مولکولی | ~ 13.7 کیلو دالتون (توالی اسید آمینه) |
| مقدار Ph | 7.6 (محدوده فعالیت 6-10) |
| دمای مناسب | 60 ℃ (محدوده فعالیت 15-70 ℃) |
| عامل فعال کننده | Na2+.ک+ |
| بازدارنده | مهارکننده Rnase |
| روش غیر فعال سازی | با حرارت غیر فعال نمی شود، پیشنهاد می شود از ستون سانتریفیوژ استفاده شود |
| اصل و نسب | گاو |
| انحلال پذیری | محلول در آب (10mg/ml) |
| از دست دادن در خشک | ≤5.0٪ |
| فعالیت آنزیمی | ≥60 واحد کونیتز در میلی گرم |
| نقطه ایزوالکتریک | 9.6 |
یادداشت
برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عمل استفاده کنید.
