نمونه رهاسازی معرف
Reagent نمونه برای سناریوهای تشخیصی POCT مولکولی است.برای دو سیستم LAMP تقویت مستقیم و PCR تقویت مستقیم، نیازی به استخراج اسید نوکلئیک نیست.لیز خام نمونه را می توان مستقیماً تقویت کرد، ژن هدف را می توان با دقت تشخیص داد، زمان تشخیص نمونه را می توان بیشتر کوتاه کرد، که کاملاً با الزامات کاربرد POCT مولکولی مطابقت دارد.برای سواب بینی، سواب گلو و سایر انواع نمونه مناسب است.نمونه های پردازش شده را می توان مستقیماً برای تشخیص فلورسانس کمی PCR یا LAMP در زمان واقعی استفاده کرد و همان نتایجی را که روش های استخراج مرسوم می توان بدون عملیات استخراج اسید نوکلئیک پیچیده به دست آورد.
شرایط نگهداری
حمل و نقل و نگهداری در دمای اتاق.
کنترل کیفیت
تشخیص عملکردی - qPCR کمی: سیستم معرف رهاسازی نمونه 800 میکرولیتر تقویت شد
با 1000 نسخه شبه ویروس جدید، یک نمونه سواب بینی، منحنی های تقویت مشابه ومقادیر ΔCt در ± 0.5 Ct.
رویه آزمایشیپاسخ
1. 800 میکرولیتر Sample Release Reagent را بردارید و محلول لیز را در لوله نمونه برداری 1.5 میلی لیتری پخش کنید.
2. سواب بینی یا سواب گلو را با سواب بگیرید؛ روش نمونه برداری از سواب بینی: سواب استریل را بردارید و آن را داخل سوراخ های بینی قرار دهید، به آرامی تا عمق حدود 1.5 سانتی متر پیشروی کنید، به آرامی 4 بار بر روی مخاط بینی به مدت بیش از 15 ثانیه بچرخانید. سپس همان عمل را روی حفره دیگر بینی با همان سواب تکرار کنید. روش نمونه برداری از سواب گلو: سواب استریل را بردارید و به آرامی، لوزه های حلق و دیواره پشتی حلق را 3 بار پاک کنید.
3.سواب را بلافاصله در لوله نمونه برداری قرار دهید.سر سواب باید به مدت حداقل 30 ثانیه در محلول ذخیره سازی چرخانده و مخلوط شود تا اطمینان حاصل شود که نمونه به طور کامل در لوله نمونه برداری شسته شده است.
4. جوجه کشی در دمای اتاق (20 ~ 25 ℃) به مدت 1 دقیقه، آماده سازی بافر لیز کامل شد.
5. هر دو سیستم 25μl RT-PCR و RT-LAMP با مقدار 10μl از الگوی اضافه شده برای آزمایش های تشخیص سازگار بودند.
یادداشت
1. حداقل مقدار لیزات مستقیم نمونه مربوط به یک سواب منفرد را می توان تا 400μl تنظیم کرد که می تواند با توجه به نیازهای آزمایش تنظیم شود.
2. هنگامی که نمونه توسط معرف رهاسازی نمونه پردازش شد، توصیه می شود در اسرع وقت مرحله بعدی آزمایش را انجام دهید، فاصله زمان انتظار ترجیحاً کمتر از 1 ساعت باشد.
3. PH نمونه لیز اسیدی است و سیستم تشخیص نیاز به بافر خاصی دارد.برای اکثر تشخیص فلورسانس PCR، RT-PCR و LAMP با بافر pH مناسب است، اما برای تشخیص رنگ سنجی LAMP بدون بافر مناسب نیست.
