Multiplex qPCR Probe Premix
شماره گربه: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) یک پیش راه حل برای تقویت کمی PCR 2× زمان واقعی است که با حساسیت و ویژگی بالا مشخص می شود که به رنگ آبی است و اثر افزودن نمونه را دارد.این محصول یک معرف از پیش مخلوط شده 2× Mix است که تا چهار واکنش کمی فلورسنت PCR را در یک چاه واکنش امکان پذیر می کند.این محصول حاوی روش آنتی بادی اصلاح شده ژنتیکی به آنزیم Taq استارت استارت است که حساسیت و ویژگی تقویت را تا حد زیادی بهبود می بخشد.در عین حال، این محصول بافر چند واکنشی را عمیقاً بهینه کرده است که می تواند راندمان تقویت واکنش را بهبود بخشد و تقویت مؤثر قالب های با غلظت پایین را تقویت کند.از این محصول می توان برای ژنوتیپ و آنالیز کمی چندگانه استفاده کرد.
مشخصات
| شروع داغ | راه اندازی گرم داخلی |
| روش تشخیص | تشخیص پرایمر-کاوشگر |
| روش PCR | qPCR |
| پلیمراز | Taq DNA پلیمراز |
| نوع نمونه | DNA |
شرایط نگهداری
این محصول با یخ خشک ارسال می شود و می توان آن را در دمای -25 تا -15 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال نگهداری کرد.
دستورالعمل ها
1. واکنشسیستم
| اجزاء | حجم (μL) | غلظت نهایی |
| 2× TaqMan Multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| مخلوط پرایمر (10 میکرومول در لیتر) a | × | 0.1 - 0.5 میکرومول در لیتر |
| مخلوط پروب (10 میکرومول در لیتر)b | × | 50 - 250 نانومول در لیتر |
| رنگ مرجع راکس | 0.5 | 1× |
| DNA/cDNA الگو | 1-10 | - |
| ddH2O | تا 25 | - |
یادداشت:قبل از استفاده کاملاً مخلوط کنید تا از ایجاد حباب های زیاد در اثر تکان دادن شدید جلوگیری شود.
آ.غلظت پرایمر: مخلوط پرایمر حاوی چندین جفت پرایمر است که معمولاً هر پرایمر در غلظت نهایی 0.2 میکرومول در لیتر است و همچنین می‌توان آن را بین 0.1 تا 0.5 میکرومول در لیتر تنظیم کرد.
بغلظت پروب: مخلوط پروب حاوی چندین پروب با سیگنال های فلورسانس مختلف است و غلظت هر پروب را می توان با توجه به شرایط خاص بین 50 تا 250 نانومول در لیتر تنظیم کرد.
1.مرجع رنگ Rox: در ابزار تقویت Real Time PCR مانند Applied Biosystems برای تصحیح خطای سیگنال فلورسانس تولید شده بین چاه ها استفاده می شود.این محصول حاوی مرجع رنگ Rox نیست.در صورت نیاز Cas#10200 توصیه می شود.
2.رقیق سازی الگو: qPCR بسیار حساس است و برای استفاده توصیه می شود که الگو را رقیق کنید.اگر الگو یک محلول ذخیره cDNA باشد، حجم قالب نباید از 1/10 حجم کل تجاوز کند.
3.سیستم واکنش: 25 میکرولیتر، 30 میکرولیتر یا 50 میکرولیتر برای اطمینان از اثربخشی و تکرارپذیری تکثیر ژن هدف توصیه می شود.
4.آماده‌سازی سیستم: لطفاً در نیمکت فوق‌العاده تمیز آماده کنید و از نوک‌ها و لوله‌های واکنش بدون باقیمانده هسته استفاده کنید.توصیه می شود از نکات با کارتریج های فیلتر استفاده کنید.از آلودگی متقابل و آلودگی آئروسل خودداری کنید.
2.برنامه واکنش
| مرحله چرخه | دما. | زمان | چرخه ها |
| دناتوراسیون اولیه | 95 ℃ | 5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 ℃ | 15 ثانیه | 45 |
| بازپخت / گسترش | 60 ℃ | 30 ثانیه |
یادداشت:
1.بازپخت / گسترش: دما و زمان را می توان به طور مناسب با توجه به مقدار Tm آغازگر طراحی شده تنظیم کرد.
2.دریافت سیگنال فلورسانس: زمان دریافت سیگنال فلورسانس مورد نیاز برای ابزارهای مختلف تشخیص qPCR متفاوت است، لطفاً با توجه به حداقل محدودیت زمانی تنظیم کنید.زمان چند ساز رایج به صورت زیر تنظیم می شود:
20 ثانیه: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 ثانیه: Applied Biosystems 7300
32 ثانیه: Applied Biosystems 7500
یادداشت
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
