Rnase A

ریبونوکلئاز A(RNaseA) یک پلی پپتید تک رشته ای است که حاوی 4 پیوند دی سولفیدی با وزن مولکولی حدود 13.7 کیلو دالتون است.RNase یک اندوریبونوکلئاز است که به طور خاص RNA تک رشته ای را در باقیمانده های C و U تجزیه می کند.به طور خاص، شکاف پیوند فسفودی استری تشکیل شده توسط 5'-ریبوز یک نوکلئوتید و گروه فسفات روی 3'-ریبوز نوکلئوتید پیریمیدین مجاور را تشخیص می دهد، به طوری که فسفات های 2,3'-حلقه ای به مقدار مربوطه هیدرولیز می شوند. فسفات های نوکلئوزیدی (به عنوان مثال، pG-pG-pC-pA-pG توسط RNase A برای تولید pG-pG-pCp و A-PG شکسته می شود).RNase A فعال ترین در برش RNA تک رشته ای است.غلظت کاری توصیه شده 1-100 میکروگرم بر میلی لیتر است که با سیستم های واکنش مختلف سازگار است.غلظت کم نمک (0-100 میلی مولار NaCl) را می توان برای برش زنجیره های RNA تک رشته ای، RNA دو رشته ای و RNA تشکیل شده توسط هیبریداسیون RNA-DNA استفاده کرد.

با این حال، در غلظت نمک بالا (≥0.3 M)، RNase A فقط به طور خاص RNA تک رشته ای را می شکافد.

RNase A معمولاً برای حذف RNA در هنگام تهیه DNA پلاسمید یا DNA ژنومی استفاده می شود.فعال بودن یا نبودن DNase در طول فرآیند آماده سازی می تواند به راحتی بر واکنش تأثیر بگذارد.از روش سنتی جوشاندن در حمام آب می توان برای غیرفعال کردن فعالیت DNase استفاده کرد.این محصول حاوی DNase و پروتئاز نیست و قبل از استفاده نیازی به عملیات حرارتی ندارد.علاوه بر این، این محصول همچنین می تواند در آزمایشات زیست شناسی مولکولی مانند آنالیز حفاظت RNase و تجزیه و تحلیل توالی RNA استفاده شود.