DNase I (Rnase Free) (5u/ul)
شماره گربه: HC4007A
DNase I (دئوکسی ریبونوکلئاز I) یک اندودئوکسی ریبونوکلئاز است که می تواند DNA تک یا دو رشته ای را هضم کند.پیوندهای فسفودی استر را برای تولید مونودئوکسی نوکلئوتیدها یا اولیگودئوکسی نوکلئوتیدهای تک یا دو رشته ای با گروه های فسفات در ترمینال 5' و هیدروکسیل در ترمینال 3' شناسایی کرده و می شکافد.فعالیت DNase I به Ca بستگی دارد2+و می تواند توسط یون های فلزی دو ظرفیتی مانند منگنز فعال شود2+و روی2+.5 میلی متر کلسیم2+از آنزیم در برابر هیدرولیز محافظت می کند.در حضور Mg2+، آنزیم می تواند به طور تصادفی هر محل را در هر رشته ای از DNA تشخیص دهد و شکاف دهد.با حضور من2+رشته‌های دوتایی DNA را می‌توان به طور همزمان شناسایی کرد و تقریباً در همان محل شکاف داد تا قطعات DNA انتهای صاف یا قطعات DNA انتهایی چسبنده با 1-2 نوکلئوتید بیرون زده را تشکیل دهند.
اجزاء
| نام | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I، بدون RNase | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر | 1 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
| بافر 10×DNase I | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر | 5 × 1 میلی لیتر | 5×10 میلی لیتر |
شرایط نگهداری
-25℃~-15℃ برای ذخیره سازی؛حمل و نقل زیر کیسه های یخ.
دستورالعمل ها
1. محلول واکنش را در لوله بدون RNase با توجه به نسبت های ذکر شده در زیر آماده کنید:
| جزء | جلد |
| RNA | X میکروگرم |
| بافر 10 × DNase I | 1 میکرولیتر |
| DNase I، بدون RNase (5U/μL) | 1 U در هر میکروگرم RNA① |
| ddH2O | تا 10 میکرولیتر |
توجه: ①حجم DNase I که باید بر اساس مقدار RNA اضافه شود را محاسبه کنید.
2. 37 ℃ به مدت 15 دقیقه؛
3. 0.5M EDTA را به غلظت نهایی 2.5mM~5mM اضافه کنید و در دمای 65 درجه به مدت 10 دقیقه حرارت دهید تا واکنش متوقف شود.نمونه را می توان مستقیماً برای واکنش بعدی مانند رونویسی معکوس استفاده کردآزمایش
تعریف واحد
یک واحد به عنوان مقدار آنزیمی تعریف می شود که 1 میکروگرم pBR322 را به طور کامل تجزیه می کند.DNA در 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد.
کنترل کیفیت
RNase:5U از DNase I با 1.6 میکروگرم MS2 RNA به مدت 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد هیچ تخریبی ایجاد نمی کند.توسط الکتروفورز ژل آگارز تعیین می شود.
یادداشت
1. لطفا 0.5MEDTA را خودتان تهیه کنید.
2. از 1U DNase I در هر میکروگرم RNA استفاده کنید.با این حال، اگر RNA کمتر از 1 میکروگرم است، لطفاً از 1U DNase I استفاده کنید.
3. لطفاً آنزیم را در حین کار روی یخ قرار دهید.
