Bst 2.0 DNA Polymerase (بدون گلیسرول)
Bst DNA پلیمراز V2 از Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I مشتق شده است که دارای فعالیت DNA پلیمراز 5'→3' و فعالیت جایگزینی زنجیره قوی است، اما فعالیت اگزونوکلئاز 5'→3' ندارد.Bst DNA Polymerase V2 برای جابجایی رشته، LAMP تقویت همدما (تقویت همدما با واسطه حلقه) و توالی یابی سریع مناسب است.
اجزاء
| جزء | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNA پلیمراز V2 (بدون گلیسرول) (8U/μL) | 0.2 میلی لیتر | 1 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
| بافر 10×HC Bst V2 | 1.5 میلی لیتر | 2×1.5 میلی لیتر | 3×10 میلی لیتر |
| MgSO4(100 میلی متر) | 1.5 میلی لیتر | 2×1.5 میلی لیتر | 2×10 میلی لیتر |
برنامه های کاربردی
تقویت همدما 1.LAMP
2. واکنش جابجایی تک رشته DNA
3. تعیین توالی ژن GC بالا
4. تعیین توالی DNA در سطح نانوگرم.
شرایط نگهداری
حمل و نقل در دمای 0 درجه سانتیگراد و در دمای 25- تا 15 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
تعریف واحد
یک واحد به عنوان مقدار آنزیمی است که 25 نانومول dNTP را در مواد نامحلول در اسید در 30 دقیقه در دمای 65 درجه سانتیگراد ترکیب می کند.
کنترل کیفیت
1.سنجش خلوص پروتئین (SDS-PAGE):خلوص Bst DNA پلیمراز V2 ≥99٪ با تجزیه و تحلیل SDS-PAGE با استفاده از تشخیص Coomassie Blue تعیین می شود.
2.فعالیت اگزونوکلئاز:جوجه کشی یک واکنش 50 میکرولیتری حاوی حداقل 8 واحد Bst DNA پلیمراز V2 با 1 میکروگرم DNA هضمی λ -Hind Ⅲ به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص نمی شود.
3.فعالیت Nickase:انکوباسیون یک واکنش 50 میکرولیتری حاوی حداقل 8 واحد Bst DNA پلیمراز V2 با 1 میکروگرم DNA pBR322 به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص نمی شود.
4.فعالیت RNase:جوجه کشی یک واکنش 50 میکرولیتری حاوی حداقل 8 U Bst DNA پلیمراز V2 با 1.6 میکروگرم MS2 RNA به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص نمی شود.
5.DNA E. coli:120 واحد از Bst DNA پلیمراز V2 برای حضور DNA ژنومی E. coli با استفاده از TaqMan qPCR با پرایمرهای اختصاصی برای مکان E. coli 16S rRNA غربالگری می شود.آلودگی DNA ژنومی E. coli ≤1 کپی است.
واکنش لامپ
| اجزاء | 25μL |
| بافر 10×HC Bst V2 | 2.5 میکرولیتر |
| MgSO4 (100 میلی متر) | 1.5 میکرولیتر |
| dNTP (هر کدام 10 میلی‌متر) | 3.5 میکرولیتر |
| SYTO™ 16 سبز (25×)a | 1.0 میکرولیتر |
| مخلوط پرایمرb | 6 میکرولیتر |
| Bst DNA Polymerase V2 (بدون گلیسرول) (8 U/uL) | 1 میکرولیتر |
| قالب | × μL |
| ddH2O | تا 25 میکرولیتر |
یادداشت:
1) الف.SYTOTM 16 Green (25×): با توجه به نیازهای تجربی، می توان از رنگ های دیگر به عنوان جایگزین استفاده کرد.
2) ب.مخلوط پرایمر: با مخلوط کردن 20 میکرومولار FIP، 20 میکرومولار BIP، 2.5 میکرومولار F3، 2.5 میکرومولار B3، 5 میکرومولار LF، 5 میکرومولار LB و حجم های دیگر به دست می آید.
واکنش و شرایط
بافر 1 × HC Bst V2، دمای انکوباسیون بین 60 تا 65 درجه سانتی گراد است.
غیر فعال سازی حرارتی
80 درجه سانتیگراد، 20 دقیقه
