Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
شماره گربه: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) یک کیت PCR کمی چندگانه بر اساس RNA به عنوان الگو است.در فرآیند آزمایش، رونویسی معکوس و PCR کمی در همان لوله انجام شد که عملیات آزمایشی را ساده کرد و خطر آلودگی را کاهش داد.در این کیت، اولین رشته cDNA به طور موثر توسط رونوشت معکوس مقاوم در برابر حرارت سنتز شد و به طور کمی توسط HotStart Tag DNA Polymerase تقویت شد.این کیت عمدتاً حاوی بافر MP بهینه شده، مخلوط آنزیم‌ها و غیره است. محلول بافر از قبل حاوی منیزیم است2+و dNTP.علاوه بر این، عواملی که می توانند به طور موثری تقویت غیر اختصاصی PCR را مهار کنند و راندمان تقویت چندین واکنش qPCR را بهبود بخشند، اضافه می شوند که می توانند کارایی تقویت را تضمین کنند و تا واکنش تقویت چندگانه را انجام دهند.سیستم dUTP/UDG برای جلوگیری موثر از خطر آلودگی آئروسل اضافه شد.
اجزاء
1. بافر
2. آنزیم مخلوط
مشخصات
| شروع داغ | راه اندازی گرم داخلی |
| روش تشخیص | تشخیص پرایمر-کاوشگر |
| روش PCR | RT-qPCR یک مرحله ای |
| پلیمراز | Taq DNA پلیمراز |
| نوع نمونه | DNA |
شرایط نگهداری
این محصول با یخ خشک ارسال می شود و می توان آن را در دمای -25 ~ -15 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری کرد.باید از مکرر اجتناب شودانجماد-ذوبتوصیه می شود به طور جداگانه ذخیره کنید.
دستورالعمل ها
1.واکنش سیستم
| اجزاء | حجم (μL) | غلظت نهایی |
| بافر 2×MP | 12.5 | 1× |
| مخلوط آنزیمی | 1 | - |
| مخلوط پرایمر/پراب (2.5 میکرومولار) | 3 | 0.3μM |
| الگوی RNA | 1-10 | - |
| RNase Free H2O | تا 25 | - |
یادداشت:
حتما قبل از استفاده خوب مخلوط کنید، از ایجاد حباب بیش از حد ناشی از لرزش شدید اجتناب کنید.
آ.غلظت پرایمر: مخلوط پرایمر شامل پرایمر مالتی پلکس، بسته به موقعیت، غلظت بهینه پرایمر ممکن است بین 0.l تا 1.0μM باشد.
بغلظت پروب: مخلوط پروب شامل گروه فلورسنت تفاوت برچسب زدن پروب چندگانه، بسته به موقعیت غلظت پروب بهینه ممکن است بین 0.05 و 0.5μM باشد.
جرقیق سازی الگو: qPCR بسیار حساس است و توصیه می شود که قالب را رقیق کنید.مقدار Ct کنترلی بین 20 تا 35 مناسب است.
دآماده‌سازی سیستم: لطفاً در میز کار فوق‌العاده تمیز و پیپتور و لوله واکنش بدون باقی‌مانده هسته‌ای آماده کنید.توصیه می شود از سر تفنگ با عنصر فیلتر استفاده کنید.از آلودگی متقابل و آلودگی آئروسل خودداری کنید.
2. دوچرخه سواری بهینهپروتکل
| چرخه گام | دما | زمان | چرخه ها |
| رونویسی معکوس | 50 درجه سانتیگرادآ | 20 دقیقه | 1 |
| دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
| واکنش تقویت | 95 درجه سانتیگراد | 15 ثانیه |
40-45 |
| 60 درجه سانتیگراد b | 30 ثانیه c |
یادداشت:
آ.رونویسی معکوس: دما می تواند 42 درجه سانتیگراد یا 50 درجه سانتیگراد را انتخاب کند.
بواکنش تقویت: درجه حرارت با توجه به مقدار Tm پرایمرهای طراحی شده تنظیم می شود.
جدریافت سیگنال فلورسانس: لطفاً روش آزمایشی را مطابق با الزامات کتابچه راهنمای ابزار تنظیم کنید.
یادداشت
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود از تجهیزات حفاظتی لازم مانند روپوش آزمایشگاهی و دستکش استفاده کنید.
