Robustart Taq DNA Polymerase
Robustart Taq DNA Polymerase یک DNA پلیمراز شروع داغ است.این محصول نه تنها می تواند واکنش غیر اختصاصی ناشی از بازپخت غیر اختصاصی پرایمرها یا تجمع پرایمر را در فرآیند آماده سازی و تقویت سیستم PCR بهتر مهار کند.بنابراین ویژگی بسیار خوبی دارد و برای تقویت قالب های با غلظت کم موثرتر است و برای واکنش تقویت PCR مالتی پلکس مناسب است.علاوه بر این، این محصول کاربرد بسیار خوبی دارد و نتایج تقویت پایدار را می توان در انواع مختلف واکنش های PCR به دست آورد.
اجزاء
1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase
2.10 × PCR بافر II (Mg² + رایگان) (اختیاری)
3.25 میلی‌مولار MgCl2(اختیاری)
* 10 × PCR بافر II (Mg²+ رایگان) حاوی dNTP و Mg²+ نیست، لطفاً dNTPs و MgCl را اضافه کنید2هنگام تهیه سیستم واکنش
برنامه های کاربردی توصیه شده
1.تقویت سریع
2.تقویت چندگانه
3.تکثیر مستقیم خون، سواب و نمونه های دیگر.
4.تشخیص بیماری های تنفسی
شرایط نگهداری
-20 درجه سانتیگراد برای نگهداری طولانی مدت، باید قبل از استفاده خوب مخلوط شود، از یخ زدن و ذوب مکرر خودداری شود.
*اگر بارش پس از سرد شدن اتفاق بیفتد، طبیعی است.توصیه می شود قبل از مخلوط کردن و استفاده در دمای اتاق متعادل شود.
تعریف واحد
یک واحد فعال (U) به عنوان مقدار آنزیمی تعریف می شود که 10 نانومول از دئوکسی ریبونوکلئوتید را در مواد نامحلول در اسید در دمای 74 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه با استفاده از DNA اسپرم فعال شده ماهی قزل آلا به عنوان الگو/پرایمر ترکیب می کند.
کنترل کیفیت
1.خلوص الکتروفورتیک SDS-PAGE بیشتر از 98٪.
2.حساسیت تقویت، کنترل دسته به دسته، پایداری.
3.بدون فعالیت هسته اگزوژن، بدون آلودگی آندونوکلئاز خارجی یا اگزونوکلئاز
دستورالعمل ها
تنظیم واکنش
| اجزاء | جلد (μL) | غلظت نهایی |
| 10 × PCR بافر II (Mg² + رایگان)a | 5 | 1× |
| dNTP (هر dNTP 10 میلی‌مولار) | 1 | 200 میکرومولار |
| 25 میلی‌مولار MgCl2 | 2-8 | 1-4 میلی متر |
| Robustart Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.25-0.5 | 1.25-2.5 U |
| 25× مخلوط پرایمرب | 2 | 1× |
| قالب | - | ＜ 1 میکروگرم در واکنش |
| ddH2O | به 50 | - |
یادداشت:
1) الف.بافر حاوی dNTP و Mg²+ نیست، لطفاً dNTP و MgCl را اضافه کنید2هنگام تهیه سیستم واکنش
2) ب.در صورت استفاده برای qPCR/qRT-PCR، پروب های فلورسنت باید به سیستم واکنش اضافه شوند.معمولاً غلظت نهایی پرایمر 0.2 میکرومولار نتایج خوبی به همراه خواهد داشت.اگر عملکرد واکنش ضعیف باشد، غلظت آغازگر را می توان در محدوده 0.2-1 میکرومولار تنظیم کرد.غلظت پروب معمولاً در محدوده 0.1-0.3 میکرومولار بهینه می شود.برای یافتن بهترین ترکیب پرایمر و پروب می توان آزمایش های گرادیان غلظت را انجام داد.
پروتکل ترمال سیکلینگ
| PCR منظمروند | |||
| گام | درجه حرارت | زمان | چرخه ها |
| پیش دناتوراسیون | 95 درجه سانتیگراد | 1-5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 درجه سانتیگراد | 10-20 ثانیه | 40-50 |
| بازپخت / گسترش | 56-64 ℃ | 20-60 ثانیه | |
| PCR سریعروند | |||
| گام | درجه حرارت | زمان | چرخه ها |
| پیش دناتوراسیون | 95 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 درجه سانتیگراد | 1-5 ثانیه | 40-45 |
| بازپخت / گسترش | 56-64 ℃ | 5-20 ثانیه | |
یادداشت
1.سرعت تقویت DNA پلیمراز سریع نباید کمتر از 1 kb/10 باشد.نرخ افزایش و کاهش دما، حالت کنترل دما و راندمان هدایت حرارتی ابزارهای مختلف PCR بسیار متفاوت است، بنابراین توصیه می‌شود شرایط واکنش بهینه را برای دستگاه PCR سریع خاص بهینه کنید.
2.این سیستم بسیار سازگار است، با ویژگی و حساسیت بالاتر.
3.مناسب برای استفاده به عنوان معرف های تشخیص PCR با حساسیت بالا، و می تواند در واکنش های تقویت PCR چندگانه استفاده شود.
4.5'→3' فعالیت پلیمراز، 5'→3' فعالیت اگزونوکلئاز.هیچ فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5';بدون عملکرد تصحیح
5.مناسب برای تست های کمی و کیفی PCR و RT-PCR.
6.انتهای 3' محصول PCR A است که می تواند مستقیماً در یک ناقل T کلون شود.
7.روش سه مرحله ای برای پرایمرهایی با دمای بازپخت پایین یا برای تکثیر قطعات بیشتر از 200 جفت باز توصیه می شود.
