Ultra Nuclease درجه GMP
شماره گربه: HC2016A
UltraNuclease GMP-grade در اشریشیا کلی (E.coli) توسط مهندسی ژنتیکی و تهیه شده در محیط های GMP بیان و خالص سازی می شود.این می تواند ویسکوزیته رویی سلول و لیز سلولی را در تحقیقات علمی کاهش دهد، کارایی تصفیه پروتئین را افزایش دهد و تحقیقات عملکردی پروتئین را افزایش دهد.این محصول همچنین می‌تواند باقی‌مانده‌های اسید نوکلئیک میزبان را به درجه pg کاهش دهد، و عملکرد و ایمنی محصولات بیولوژیکی از جمله تصفیه ویروس، تولید واکسن، و تولید دارویی پروتئین/پلی‌ساکارید را بهبود بخشد.علاوه بر این، این محصول همچنین می تواند برای جلوگیری از تجمع سلول های تک هسته ای خون محیطی انسان (PBMC) در سلول درمانی و توسعه واکسن استفاده شود.
UltraNuclease به شکل یک معرف استریل شده، شسته شده در بافر (20 میلی مولار Tris-HCL pH 8.0، 2 میلی مولار MgCl، 20 میلی مولار NaCl، 50٪ گلیسیرین)، با ظاهر یک مایع بی رنگ و شفاف ارائه می شود.این محصول با الزامات فرآیند GMP تولید و به صورت مایع ارائه می شود.
اجزاء
درجه اولترا نوکلئاز GMP (250 U/μL)
شرایط نگهداری
این محصول با یخ خشک ارسال می شود و می توان آن را در دمای -25-~ 15 درجه سانتیگراد به مدت دو سال نگهداری کرد.
اگر محصول باز است و بیش از یک هفته در دمای 4 درجه نگهداری شده است، فیلتر کردن را توصیه می کنیممحصول برای جلوگیری از آلودگی میکروبی
مشخصات فنی
| میزبان بیان | E. coli نوترکیب با ژن UltraNuclease |
| وزن مولکولی | 26.5 کیلو دالتون |
| نقطه برق | 6.85 |
| خلوص | ≥99٪ (SDS-PAGE) |
| بافر ذخیره سازی | 20 میلی‌مولار Tris-HCL pH 8.0، 2 میلی‌مولار MgCl، 20 میلی‌مولار NaCl، 50 درصد گلیسیرین |
|
تعریف واحد | تعریف یک واحد فعالیت (U) مقدار آنزیمی است که برای آن استفاده می شودمقدار جذب ΔA260 را 1.0 در 30 دقیقه در 2.625 میلی لیتر تغییر دهید.سیستم واکنش در دمای 37 درجه سانتیگراد با pH 8.0 (معادل هضم کامل37 میکروگرم DNA اسپرم ماهی آزاد به الیگونوکلئوتیدها). |
دستورالعمل ها
1. نمونه مجموعه
سلول های چسبنده: محیط را بردارید، سلول ها را با PBS بشویید و مایع رویی را بردارید.
سلول های سوسپانسیون: سلول ها را با سانتریفیوژ جمع آوری کنید، سلول ها را با PBS شستشو دهید، سانتریفیوژ کنید در 6000دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه، گلوله را جمع آوری کنید.
اشریشیا کلی: باکتری ها را با سانتریفیوژ جمع آوری کنید، یک بار با PBS شستشو دهید، سانتریفیوژ کنید در 8000دور در دقیقه به مدت 5 دقیقه، و گلوله را جمع آوری کنید.
2. نمونه درمانی
گلوله های سلولی جمع آوری شده را با بافر لیز به نسبت جرم (گرم) به حجم (میلی لیتر) 1: (20-10) یا با روش های مکانیکی یا شیمیایی روی یخ یا در دمای اتاق (1 گرم گلوله سلولی حاوی حدود
109 سلول).
3. درمان آنزیمی
1-5 میلی مولار MgCl به سیستم واکنش اضافه کنید و pH را روی 8-9 تنظیم کنید.
UltraNuclease را با توجه به نسبت 250 واحد برای هضم 1 گرم گلوله سلولی اضافه کنید، در دمای 37 درجه سانتیگراد برای بیش از 30 دقیقه انکوبه کنید.لطفاً برای انتخاب به فرم "زمان واکنش توصیه شده" مراجعه کنیدمدت زمان درمان
4. رویی مجموعه
به مدت 30 دقیقه در 12000 دور در دقیقه سانتریفیوژ کرده و مایع رویی را جمع آوری کنید.
توجه: اگر محلول اسیدی یا قلیایی باشد یا حاوی غلظت بالایی از نمک، مواد شوینده یادناتوره ها، لطفا دوز آنزیم را افزایش دهید یا زمان درمان را بر این اساس افزایش دهید.
شرایط واکنش توصیه شدهدر
| پارامتر | وضعیت بهینه | شرایط موثر |
| Mg² + غلظت | 1-5 میلی متر | 1-10 میلی متر |
| pH | 8-9 | 6-10 |
| درجه حرارت | 37 درجه سانتیگراد | 0-42 درجه سانتیگراد |
| غلظت DTT | 0-100 میلی متر | > 0 میلی متر |
| غلظت مرکاپتواتانول | 0-100 میلی متر | > 0 میلی متر |
| غلظت کاتیون تک ظرفیتی | 0-20 میلی متر | 0-150 میلی متر |
| غلظت فسفات lon | 0-10 میلی متر | 0-100 میلی متر |
توصیه شده واکنش زمان (37℃، 2 mM Mg²+، pH 8.0)
| مقدار UltraNuclease (غلظت نهایی) | زمان پاسخ |
| 0.25 U/ml | > 10 ساعت |
| 2.5 U/ml | > 4 ساعت |
| 25 U/ml | 30 دقیقه |
یادداشت:
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
