کیت استخراج DNA/RNA ویروسی
این کیت برای استخراج سریع DNA/RNA ویروسی با خلوص بالا از نمونه هایی مانند سواب های نازوفارنکس، سواب های محیطی، رویی کشت سلولی و رویی هموژنه بافتی مناسب است.این کیت مبتنی بر فناوری تصفیه غشای سیلیکا است که نیاز به استفاده از حلال‌های آلی فنل/کلروفرم یا رسوب زمان‌بر الکل را برای استخراج DNA/RNA ویروسی با کیفیت بالا حذف می‌کند.اسیدهای نوکلئیک به‌دست‌آمده عاری از ناخالصی‌ها هستند و آماده استفاده در آزمایش‌های پایین‌دستی مانند رونویسی معکوس، PCR، RT-PCR، Real-time PCR، توالی‌یابی نسل بعدی (NGS) و شمالی بلات هستند.
شرایط نگهداری
در دمای 15 تا 25 درجه سانتیگراد نگهداری کنید و در دمای اتاق حمل کنید
اجزاء
| اجزاء | 100RXNS |
| بافر VL | 50 میلی لیتر |
| بافر RW | 120 میلی لیتر |
| ddH2 O بدون RNase | 6 میلی لیتر |
| ستون های RNA FastPure | 100 |
| لوله های مجموعه (2 میلی لیتر) | 100 |
| لوله های مجموعه بدون RNase (1.5 میلی لیتر) | 100 |
بافر VL:محیطی برای لیز و اتصال فراهم کنید.
بافر RW:پروتئین های باقیمانده و سایر ناخالصی ها را حذف کنید.
ddH2O بدون RNase:DNA/RNA را از غشا در ستون اسپین شستشو دهید.
ستون های RNA FastPure:به طور خاص DNA/RNA را جذب کنید.
لوله های مجموعه 2 میلی لیتر:فیلتر را جمع آوری کنید.
لوله های مجموعه بدون RNase 1.5 میلی لیتر:DNA/RNA را جمع آوری کنید.
برنامه های کاربردی
سواب های نازوفارنکس، سواب های محیطی، سواب های رویی کشت سلولی و سواب های هموژن بافتی.
ماتر خودآمادهals
نوک پیپت بدون RNase، لوله سانتریفیوژ 1.5 میلی لیتری بدون RNase، سانتریفیوژ، میکسر ورتکس و پیپت.
فرآیند آزمایش
تمام مراحل زیر را در کابینت ایمنی زیستی انجام دهید.
1. 200 میکرولیتر از نمونه را به یک لوله سانتریفیوژ بدون RNase اضافه کنید (در صورت کمبود نمونه با PBS یا 0.9٪ NaCl جبران کنید)، 500 میکرولیتر Buffer VL اضافه کنید، با گرداب به مدت 15 تا 30 ثانیه خوب مخلوط کنید و سانتریفیوژ کنید. به طور خلاصه مخلوط را در انتهای لوله جمع کنید.
2. ستون های FastPure RNA را در یک مجموعه لوله 2 میلی لیتری قرار دهید.مخلوط را از مرحله 1 به ستون های RNA FastPure منتقل کنید، با سرعت 12000 دور در دقیقه (13400 × گرم) به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید و فیلتر را دور بریزید.
3. 600 میکرولیتر بافر RW را به ستون های FastPure RNA اضافه کنید، با سرعت 12000 دور در دقیقه (13400 × گرم) به مدت 30 ثانیه سانتریفیوژ کنید و فیلتر را دور بریزید.
4. مرحله 3 را تکرار کنید.
5. ستون خالی را در 12000 دور در دقیقه (13400 × گرم) به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
6. ستون‌های FastPure RNA را با دقت به لوله‌های جمع‌آوری بدون RNase 1.5 میلی‌لیتری (ارائه شده در کیت) منتقل کنید و 30 تا 50 میکرولیتر ddH2O بدون RNase را بدون لمس ستون به مرکز غشا اضافه کنید.اجازه دهید به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق بماند و با سرعت 12000 دور در دقیقه (13400 × گرم) به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کنید.
7. ستون های FastPure RNA را دور بریزید.DNA/RNA را می توان به طور مستقیم برای سنجش های بعدی استفاده کرد، یا در -30-~15°C برای مدت کوتاهی یا -85-~-65°C برای مدت طولانی تری ذخیره کرد.
یادداشت
فقط برای استفاده تحقیقاتیبرای استفاده در روش های تشخیصی نیست.
1. نمونه ها را از قبل با دمای اتاق متعادل کنید.
2. ویروس ها بسیار عفونی هستند.لطفاً اطمینان حاصل کنید که تمام اقدامات احتیاطی لازم قبل از آزمایش انجام شده است.
3. از انجماد و ذوب مکرر نمونه خودداری کنید، زیرا ممکن است منجر به تخریب یا کاهش بازده DNA/RNA ویروسی استخراج شده شود.
4. تجهیزات خود آماده شامل نوک پیپت بدون RNase، لوله سانتریفیوژ بدون RNase 1.5 میلی لیتری، سانتریفیوژ، میکسر گرداب و پیپت می باشد.
5. هنگام استفاده از کیت، از کت آزمایشگاه، دستکش لاتکس یکبار مصرف و ماسک یکبار مصرف استفاده کنید و از مواد مصرفی بدون RNase استفاده کنید تا خطر آلودگی RNase را به حداقل برسانید.
6. تمام مراحل را در دمای اتاق انجام دهید مگر اینکه طور دیگری مشخص شده باشد.
مکانیسم و گردش کار
