مهارکننده Rnase (بدون گلیسرول)
مهارکننده RNase موشی یک مهارکننده RNase نوترکیب موشی است که از E.coli بیان و خالص شده است.از طریق پیوند غیرکووالانسی به RNase A، B یا C با نسبت 1:1 متصل می شود، در نتیجه فعالیت سه آنزیم را مهار می کند و از RNA در برابر تخریب محافظت می کند.با این حال، در برابر RNase 1، RNase T1، S1 Nuclease، RNase H یا RNase از آسپرژیلوس موثر نیست.مهارکننده RNase موشی توسط RT-PCR، RT-qPCR و mRNA IVT مورد آزمایش قرار گرفت و با انواع مختلف رونوشت‌های معکوس تجاری، DNA پلیمرازها و RNA پلیمرازها سازگار بود.
در مقایسه با مهارکننده‌های RNase انسانی، مهارکننده RNase موشی حاوی دو سیستئین نیست که به اکسیداسیون بسیار حساس هستند که باعث غیرفعال شدن بازدارنده می‌شود.که آن را در غلظت های پایین DTT (کمتر از 1 میلی مولار) پایدار می کند.این ویژگی آن را برای استفاده در واکنش هایی مناسب می کند که غلظت های بالای DTT برای واکنش نامطلوب است (مانند RT-PCR در زمان واقعی).
Aکاربرد
این محصول را می توان به طور گسترده در هر آزمایشی که تداخل RNase برای جلوگیری از تخریب RNA ممکن است استفاده کرد، مانند:
1. سنتز cDNA رشته اول، RT-PCR، RT-qPCR، و غیره.
2. محافظت از RNA از تخریب در رونویسی/ترجمه in-vitro (به عنوان مثال همانندسازی ویروس در شرایط آزمایشگاهی).
3. مهار فعالیت RNase در طول جداسازی و خالص سازی RNA.
شرایط نگهداری
ذخیره در -25~-15℃.
چرخه های انجماد و ذوب ≤ 5 بار؛
اعتبار برای 1 سال.
تعریف واحد
یک واحد به عنوان مقدار بازدارنده RNase مورد نیاز برای مهار فعالیت 5 نانوگرم RNase A به میزان 50٪ تعریف می شود.
وزن مولکولی
مهارکننده RNase (بدون گلیسرول) یک پروتئین 50 کیلو دالتون است.
کنترل کیفیت
اگزونوکلئاز فعالیت:
جوجه کشی 40 واحد آنزیم با 1 میکروگرم DNA هضم λ-Hind III به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد منجر به تخریب قابل تشخیص DNA نشد که توسط الکتروفورز ژل تعیین شد.
فعالیت اندونوکلئاز:
جوجه کشی 40 واحد آنزیم با 1 میکروگرم λ DNA به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص DNA نشد که توسط الکتروفورز ژل تعیین شد.
نیک زدن فعالیت:
انکوباسیون 40 واحد آنزیم با 1 میکروگرم pBR322 به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص DNA که توسط الکتروفورز ژل تعیین شد، انجام نشد.
RNase فعالیت:
انکوباسیون 40 واحد آنزیم با 1.6 میکروگرم MS2 RNA به مدت 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد منجر به تخریب قابل تشخیص RNA همانطور که توسط الکتروفورز ژل تعیین شد، نشد.
E.coli DNA:
40 واحد آنزیم توسط TaqMan qPCR شناسایی می شود.DNA E.coli ≤ 0. 1pg/40U است.
Nاوتهs
1. برای جلوگیری از غیرفعال شدن آنزیم، تکان نخورید یا به شدت هم نزنید.
2. بازدارنده RNase در دماهای بین 25 تا 55 درجه سانتیگراد فعال است و در دمای ≥65 درجه غیرفعال می شود.
3. فعالیت RNase H، RNase 1، و RNase T1 مهار نمی شود.
4. محدوده pH برای مهار فعالیت RNase گسترده است (فعال در pH 5-9)، حداکثر فعالیت را در pH 7-8 نشان می دهد.
