Superstart qPCR Premix plus-UNG
شماره گربه: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG یک معرف تخصصی است که برای واکنش های کمی و کیفی Real Time PCR با استفاده از تشخیص مبتنی بر پروب طراحی شده است که به طور خاص برای فرآیندهای لیوفیلیزاسیون توسعه یافته است.این شامل یک آنزیم جدید شروع داغ Hotstart Taq plus (DG) است که فعالیت آنزیم Taq خود را در دمای اتاق مهر و موم کرده است، و به طور موثر تقویت غیر اختصاصی ناشی از بازپخت غیر اختصاصی پرایمر یا تشکیل دایمر پرایمر در شرایط دمای پایین را مهار می کند، بنابراین بهبود می یابد. ویژگی واکنش تقویتاین معرف از یک بافر خاص qPCR بهینه شده و سیستم ضد آلودگی UNG/dUTP برای دستیابی به شروع گرم سریع استفاده می کند که کارایی و حساسیت واکنش های qPCR را تا حد زیادی بهبود می بخشد.این می تواند منحنی های استاندارد خوبی را در طیف وسیعی از مناطق کمی به دست آورد و به طور دقیق کمی را انجام دهد، و به طور موثر از تقویت مثبت کاذب ناشی از محصولات PCR باقیمانده یا آلودگی آئروسل جلوگیری می کند.این معرف با اکثر ابزارهای فلورسنت کمی PCR از سازندگانی مانند Applied Biosystems، Eppendorf، Bio-Rad و Roche و غیره سازگار است و پایداری خوبی را در فرم لیوفیلیزه از خود نشان می دهد.
ترکیب معرف
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+رایگان) (DG)
2. 250 میلی مولار MgCl2
3. 4× lyoprotecant (اختیاری)
شرایط نگهداری
ذخیره سازی طولانی مدت در -20℃؛تا 3 ماه در دمای 4 درجه سانتیگراد قابل نگهداری است.قبل از استفاده خوب مخلوط کنید واز انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید.
پروتکل دوچرخه سواری
| روش | دما | زمان | چرخه |
| هضم | 50 درجه سانتیگراد | 2 دقیقه | 1 |
| فعال سازی پلیمراز | 95 درجه سانتیگراد | 1 تا 5 دقیقه | 1 |
| دناتوره | 95 درجه سانتیگراد | 10 تا 20 ثانیه | 40-50 |
| آنیلینگ و اکستنشن | 56 ~ 64 ℃ | 20 تا 60 ثانیه | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syآماده سازی ساقه
|
ترکیب بندی |
25 میکرولیتر حجم |
حجم 50µL |
غلظت نهایی |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+رایگان) (DG) | 5 میکرولیتر | 10µL | 1× |
| 250 میلی‌مولار MgCl2 | 0.45 میکرولیتر | 0.9 میکرولیتر | 4.5 میلی متر |
| 4×لیوپروتکتانت1 | 6.25 میکرولیتر | 12.5 میکرولیتر | 1× |
| 25× مخلوط پرایمر-پراب2 | 1 میکرولیتر | 2 میکرولیتر | 1× |
| DNA الگو3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | تا 25 میکرولیتر | تا 50 میکرولیتر | —— |
1. غلظت نهایی 0.2 میکرومولار برای پرایمرها معمولاً نتایج خوبی به همراه دارد.هنگامی که عملکرد واکنش ضعیف است، غلظت پرایمر را در محدوده 0.2-1μM در صورت نیاز تنظیم کنید.غلظت پروب معمولاً در محدوده 0.1-0.3μM از طریق آزمایش‌های گرادیان برای یافتن ترکیب‌های بهینه بهینه می‌شود.
2. تعداد کپی ژن های هدف موجود در انواع مختلف الگوها متفاوت است.در صورت لزوم، رقت گرادیان را می توان برای تعیین مقدار بهینه افزودن الگو انجام داد.
3. این سیستم را می توان لیوفیلیز کرد.هنگامی که مشتریان از این سیستم بدون نیاز به خشک کردن انجماد استفاده می کنند، 4× lyoprotecant را می توان به طور انتخابی اضافه کرد؛ اگر محصولات خشک انجمادی مورد نیاز باشد، در مرحله تأیید عملکرد محصول معرف های مایع، باید 4×lyoprotecant اضافه شود تا از سازگاری با اجزای سیستم لیوفیلیزه اطمینان حاصل شود. و اثرات
زمانی که سیستم در حال استفاده استد برای خشک کردن انجمادی، آن را آماده کنید سیستم as ذیل:
| ترکیب بندی | 25µL سیستم واکنش |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+رایگان) (DG) | 5 میکرولیتر |
| 250 میلی‌مولار MgCl2 | 0.45 میکرولیتر |
| 4×لیوپروتکتانت | 6.25 میکرولیتر |
| 25× مخلوط پرایمر-پراب | 1 میکرولیتر |
| ddH2O | تا 18 تا 20 میکرولیتر |
* اگر سیستم های دیگری برای خشک کردن انجمادی مورد نیاز است، لطفاً جداگانه مشورت کنید.
فرآیند لیوفیلیزاسیونss
| روش | دما | زمان | وضعیت | فشار |
| پیش انجماد | 4℃ | 30 دقیقه | نگه دارید |
1 اتمسفر |
| -50 درجه سانتیگراد | 60 دقیقه | خنک کننده | ||
| -50 درجه سانتیگراد | 180 دقیقه | نگه دارید | ||
| خشک کردن اولیه | -30 درجه سانتیگراد | 60 دقیقه | گرمایش |
خلاء نهایی |
| -30 درجه سانتیگراد | 70 دقیقه | نگه دارید | ||
| خشک کردن ثانویه | 25 درجه سانتیگراد | 60 دقیقه | گرمایش |
خلاء نهایی |
| 25 درجه سانتیگراد | 300 دقیقه | نگه دارید |
2. فرآیند لیوفیلیزاسیون فوق فقط برای مرجع است.انواع مختلف محصول و یخ خشک کن های مختلف پارامترهای متفاوتی دارند، بنابراین می توان تنظیمات را بر اساس واقعی انجام داد.شرایط در حین استفاده
3. فرآیندهای مختلف لیوفیلیزاسیون ممکن است برای اندازه های دسته ای مختلف لیوفیلیز شده مناسب باشد.محصولات، بنابراین زمانی که برای تولید در مقیاس بزرگ استفاده می شود، باید اعتبارسنجی آزمایش کافی انجام شود.
دستورالعمل استفاده از لیوفیلیزd پودر
1. پودر لیوفیلیزه را به طور خلاصه سانتریفیوژ کنید.
2. قالب اسید نوکلئیک را به پودر لیوفیلیزه اضافه کنید و آب را تا 25 میکرولیتر اضافه کنید.
3. با سانتریفیوژ خوب مخلوط کنید و روی دستگاه اجرا کنید.
کنترل کیفیت:
1. تست عملکردی: حساسیت، ویژگی، تکرارپذیری qPCR.
2. بدون فعالیت نوکلئاز اگزوژن، بدون آلودگی اگزونوکلئاز داخلی/اگزونوکلئاز.
اطلاعات فنی:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG از یک آنزیم جدید شروع داغ استفاده می کند که شروع سریع را در عرض 1 تا 5 دقیقه امکان پذیر می کند.از طریق فرمولاسیون بافر ویژه برای واکنش های کمی فلورسنت PCR مالتی پلکس مناسب است.
2. دارای ویژگی بالاتری است که به طور قابل توجهی حساسیت تشخیص حد PCR کمی فلورسانس را بهبود می بخشد، منحنی های تقویت را عادی می کند، ارزش فلورسانس بهبود آشکاری را در قالب های غلظت پایین به دست می آورد، مناسب به عنوان معرف های تشخیص کمی فلورسانس PCR با حساسیت بالا.
3. برای پرایمرهایی با دمای بازپخت کمتر یا قطعات بیش از 200 جفت باز، روش 3 مرحله ای توصیه می شود.
4. راندمان استفاده از dUTP و حساسیت به آنزیم UNG برای ژن های هدف مختلف متفاوت است، بنابراین اگر استفاده از سیستم UNG منجر به کاهش حساسیت تشخیص شود، سیستم واکنش باید تنظیم و بهینه شود.در صورت نیاز به پشتیبانی فنی لطفا با شرکت ما تماس بگیرید.
5. از نواحی اختصاصی و پیپت ها قبل و بعد از تقویت استفاده کنید، در حین کار دستکش بپوشید و مرتباً آنها را تعویض کنید.پس از اتمام PCR، لوله واکنش را باز نکنید تا آلودگی نمونه ها توسط محصولات PCR به حداقل برسد.
