2×HiF Taq plus Master Mix
شماره گربه: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (با رنگ) یک محلول آماده برای استفاده 2× پیش مخلوط حاوی پلاس HIF DNA پلیمراز، dNTPs و بافر بهینه شده است.دو آنتی بادی مونوکلونال در دمای اتاق که فعالیت پلیمراز و فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' را مهار میکنند، به ترکیب اصلی اضافه میشوند تا به راحتی و بسیار اختصاصی Hot Start PCR.فاکتور گسترش به مخلوط اصلی اضافه می شود تا به آنزیم ظرفیت تقویت قطعه طولانی بدهد، طول تقویت می تواند تا 13 کیلوبایت باشد، آنزیم دارای فعالیت 5'→3' DNA پلیمراز و 3'→5' است. فعالیت اگزونوکلئاز، وفاداری آن 83 برابر Taq DNA پلیمراز است که 9 برابر DNA پلیمراز معمولی است.این برای تقویت قالب های پیچیده مناسب است، محصول تقویت کننده یک انتهای صاف است.
2×HIF Taq plus Master Mix (با رنگ) دارای مزایای سریع و آسان، حساسیت بالا، ویژگی قوی، پایداری خوب و غیره است، سیستم واکنش فقط نیاز به افزودن پرایمرها و قالب ها دارد و می تواند توسط دو تقویت شود. پروتکل مرحله، ساده کردن مراحل آزمایشی و صرفه جویی در زمان.این محصول حاوی رنگ های نشانگر الکتروفورز است و محصولات PCR را می توان به طور مستقیم برای الکتروفورز استفاده کرد.علاوه بر این، محصول همچنین حاوی یک عامل محافظ خاص است، به طوری که مخلوط اصلی می تواند پس از یخ زدن و ذوب مکرر فعالیت پایدار خود را حفظ کند.
شرایط نگهداری
محصولات باید در دمای -25 ~ -15 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری شوند.
مشخصات فنی
مشخصات محصول | مستر میکس |
تمرکز | 2× |
شروع داغ | Hot Start داخلی |
برآمدگی | بلانت |
سرعت واکنش | سریع |
اندازه (محصول نهایی) | تا 13 کیلوبایت |
شرایط حمل و نقل | یخ خشک |
نوع محصول | پیش میکس های PCR با وفاداری بالا |
دستورالعمل ها
1.سیستم واکنش PCR
اجزاء | حجم (μL) |
الگوی DNA | مناسب |
پرایمر جلو (10 میکرومول در لیتر) | 2.5 |
پرایمر معکوس (10 میکرومول در لیتر) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
ddH2O | تا 50 |
2.استفاده از قالب های مختلف توصیه می شود
نوع قالب | قطعات را از 1 کیلوبایت به 10 کیلوبایت تقویت کنید |
DNA ژنومی | 50ng-200ng |
DNA پلاسمید یا ویروسی | 10 pg-20ng |
cDNA | 1-2.5 میکرولیتر (از 10 درصد حجم نهایی واکنش PCR تجاوز نکنید) |
3.پروتکل تقویت
1) پروتکل دو مرحله ای (الگوی پیچیدگی)
مرحله چرخه | دما | زمان | چرخه ها |
دناتوراسیون اولیه | 98 درجه سانتیگراد | 3 دقیقه | 1 |
دناتوره سازی | 98 درجه سانتیگراد | 10 ثانیه | 30-35 |
افزونه | 68 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه در کیلوبایت | |
تمدید نهایی | 72 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
2) پروتکل سه مرحله ای (پروتکل معمولی)
مرحله چرخه | دما | زمان | چرخه ها |
دناتوراسیون اولیه | 98 درجه سانتیگراد | 3 دقیقه | 1 |
دناتوره سازی | 98 درجه سانتیگراد | 10 ثانیه | 30-35 |
آنیل کردن | 60 درجه سانتیگراد | 20 ثانیه | |
افزونه | 72 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه در کیلوبایت | |
تمدید نهایی | 72 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
3) پروتکل گرادیان بازپخت (الگوی پیچیدگی)
مرحله چرخه | درجه حرارت | زمان | چرخه ها |
دناتوراسیون اولیه | 98 درجه سانتیگراد | 3 دقیقه | 1 |
دناتوره سازی | 98 درجه سانتیگراد | 10 ثانیه | 15 (کاهش 1 درجه در هر چرخه) |
بازپخت گرادیان | 70-55 ℃ | 20 ثانیه | |
افزونه | 72 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه در کیلوبایت | |
دناتوره سازی | 98 درجه سانتیگراد | 10 ثانیه |
20 |
آنیل کردن | 55 درجه سانتیگراد | 20 ثانیه | |
افزونه | 72 درجه سانتیگراد | 30 ثانیه در کیلوبایت | |
تمدید نهایی | 72 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
ویژگی های تحت پروتکل های مختلف تقویت
پروتکوl | دو قدم | سه مرحله ای | بازپخت گرادیان |
مشخصات | سریع | متوسط | آهسته. تدریجی |
اختصاصی | بالا | متوسط | بالا |
بازده PCR | متوسط | بالا | متوسط |
میزان تشخیص | بالا | متوسط | بالا |
یادداشت
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!