One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
شماره گربه: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix برای تعیین کمیت فلورسانس بر اساس رنگ SYBR Green I است.با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن، رونویسی معکوس و واکنش‌های qPCR در یک لوله تکمیل می‌شوند، که نیاز به عملیات‌های مکرر درپوش باز کردن و لوله‌گذاری را از بین می‌برد، کارایی سنجش را تا حد زیادی بهبود می‌بخشد و خطر آلودگی را کاهش می‌دهد.برای نمونه‌های RNA، کیت از ترانس کریپتاز معکوس مقاوم در برابر حرارت برای سنتز موثر cDNA و HotStart Taq DNA Polymerase برای تقویت کمی استفاده می‌کند.تحت سیستم بافر بهینه سازی شده، حساسیت کیت می تواند تا 0.1 pg برای اهداف با بیان بالا و تا 1 pg برای اهداف با بیان متوسط باشد.این کیت برای تکثیر و کمی سازی نمونه های DNA مناسب است.تشخیص حساس و کمی اسیدهای نوکلئیک از نمونه های مختلف گیاهی و حیوانی، سلول ها و میکروارگانیسم ها را امکان پذیر می کند.
اجزاء
| No | نام | جلد | جلد |
| 1 | بافر پیشرفته | 250 میکرولیتر | 2×1.25 میلی لیتر |
| 2 | مخلوط آنزیم پیشرفته | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| 3 | RNase Free H2O | 250 میکرولیتر | 2×1.25 میلی لیتر |
شرایط نگهداری
این محصول باید به مدت 1 سال در دمای -25~-15 درجه سانتیگراد دور از نور نگهداری شود.
دستورالعمل ها
1. پیکربندی سیستم واکنشd
| اجزاء | حجم (μL) | حجم (μL) | غلظت نهایی |
| بافر پیشرفته | 12.5 | 25 | 1× |
| مخلوط آنزیم پیشرفته | 1 | 2 | - |
| پرایمر جلو (10 میکرومول در لیتر)a | 0.5 | 1 | 0.2 میکرومول در لیتر |
| پرایمر معکوس (10 میکرومول در لیتر)a | 0.5 | 1 | 0.2 میکرومول در لیتر |
| قالب RNAb | X | X | - |
| RNase Free H2Oc | تا 25 | تا 50 | - |
یادداشت:
1) الف.تیغلظت نهایی پرایمر 0.2 μmol/L بود که می‌توان آن را بین 0.1 و 1μmol/L تنظیم کرد.
2) ب.معرف بسیار حساس است، با RNA کل در محدوده 1pg-1μg، و آزمایش نمونه های انسانی ورودی بهینه 1 pg-100ng را نشان داد، و مقدار کلی Ct را در محدوده 15-30 در صورت مناسب کنترل می کند.
3) ج.توصیه می شود از 20μL یا 50μL برای اطمینان از اعتبار و تکرارپذیری تکثیر ژن هدف استفاده شود.
4) د.لطفاً در نیمکت فوق‌العاده تمیز آماده شوید و از نوک‌ها و لوله‌های واکنش بدون باقی‌مانده نوکلئاز استفاده کنید.نکاتی در مورد کارتریج های فیلتر توصیه می شود.از آلودگی متقابل و آلودگی آئروسل خودداری کنید.
2.برنامه واکنش
| مرحله چرخه | دما | زمان | چرخه ها |
| رونویسی معکوس | 50 درجه سانتیگرادa | 6 دقیقه | 1 |
| دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتیگراد | 5 دقیقه | 1 |
| واکنش تقویت | 95 درجه سانتیگراد | 15 ثانیه | 40 |
| 60 درجه سانتیگرادb | 30 ثانیه | ||
| مرحله منحنی ذوب | پیش فرض های ابزار | 1 | |
یادداشت:
1) الف.دمای رونویسی معکوس را می توان با توجه به نیازهای آزمایشی بین 50-55 درجه سانتی گراد انتخاب کرد.برای نمونه های DNA، فرآیند رونویسی معکوس را می توان حذف کرد.
2) ب.در موارد خاص، دمای بازپخت / گسترش را می توان با توجه به مقدار Tm پرایمر تنظیم کرد، 60 درجه سانتی گراد توصیه می شود.
یادداشت
1. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
2. لطفاً برای ایمنی خود با کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف کار کنید.
