اولترا هسته ای
UltraNuclease نوعی ژنتیکی مهندسی ژنتیک شده از Serratia marcescens است که قادر به تجزیه DNA یا RNA، دو رشته ای یا تک رشته ای، خطی یا دایره ای تحت طیف وسیعی از شرایط است، اسیدهای نوکلئیک را به طور کامل به الیگونوکلئوتیدهای 5'-مونوفسفات با طول 3-5 باز تجزیه می کند. .پس از اصلاح مهندسی ژنتیک، محصول تخمیر، بیان و خالص‌سازی شد در اشریشیا کلی (E. coli)، که باعث کاهش ویسکوزیته رویی سلول و تحقیقات غیرعلمی لیز سلولی می‌شود، اما کارایی خالص‌سازی و تحقیقات عملکردی پروتئین را نیز بهبود می‌بخشد.همچنین می تواند در ژن درمانی، تصفیه ویروس، تولید واکسن، پروتئین و صنعت داروسازی پلی ساکارید به عنوان یک معرف حذف اسید نوکلئیک باقی مانده میزبان استفاده شود.
مشخصات محصول
| شماره CAS | 9025-65-4 |
| شماره EC | |
| وزن مولکولی | 30 کیلو دالتون |
| نقطه ایزوالکتریک | 6.85 |
| خلوص پروتئین | ≥99% (SDS-PAGE و SEC-HPLC) |
| فعالیت خاص | ≥1.1×106U/mg |
| دمای مطلوب | 37 درجه سانتی گراد |
| pH بهینه | 8.0 |
| ProteaseActivity | منفی |
| بار زیستی | ＜10CFU/100000U |
| پروتئین سلول میزبان باقیمانده | ≤10ppm |
| هوی متال | ≤10ppm |
| اندوتوکسین باکتریایی | 0.25EU/1000U |
| بافر ذخیره سازی | 20 میلی‌مولار Tris-HCl، pH 8.0، 2 میلی‌مولار MgCl2، 20 میلی‌مولار NaCl، 50٪ گلیسرول |
شرایط نگهداری
حمل و نقل ≤0 درجه سانتیگراد، ذخیره سازی - 25 ~ 15 درجه سانتیگراد، اعتبار 2 سال (از انجماد و ذوب شدن خودداری کنید).
تعریف واحد
مقدار آنزیم مورد استفاده برای تغییر مقدار جذب △A260 به میزان 1.0 در 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد، pH 8.0، معادل 37 میکروگرم DNA اسپرم ماهی قزل آلا با برش به الیگونوکلئوتیدها، به عنوان یک واحد فعال (U) تعریف شد.
کنترل کیفیت
پروتئین سلول میزبان باقیمانده: کیت الایزا
•پروتئاز باقی مانده ها: 250KU/mL UltraNuclease با سوبسترا به مدت 60 دقیقه واکنش نشان داد، هیچ فعالیتی تشخیص داده نشد.
•اندوتوکسین باکتریایی: LAL-Test، فارماکوپه جمهوری خلق چین جلد 4 (نسخه 2020) روش تست حد ژل.قواعد عمومی (1143).
•بار زیستی: فارماکوپه جمهوری خلق چین جلد 4 (نسخه 2020) - عمومی
قوانین تست عقیمی (1101)، استاندارد ملی PRC، GB 4789.2-2016.
•هوی متال:ICP-AES، HJ776-2015.
عمل
فعالیت UltraNuclease زمانی که غلظت SDS بیش از 0.1٪ یا EDTA بود به طور قابل توجهی مهار شد.
غلظت بیش از 1 میلی مولار بود. سورفکتانت Triton X-100، Tween 20 و Tween 80 هیچ تاثیری بر نوکلئاز نداشتند.
خواص زمانی که غلظت زیر 1.5٪ بود.
| عمل | عملیات بهینه | عملیات معتبر |
| درجه حرارت | 37 درجه سانتیگراد | 0-45 درجه سانتیگراد |
| pH | 8.0-9.2 | 6.0- 11.0 |
| Mg2+ | 1-2 میلی متر | 1- 15 میلی متر |
| DTT | 0- 100 میلی متر | > 100 میلی متر |
| 2-مرکاپتواتانول | 0- 100 میلی متر | > 100 میلی متر |
| یون فلزی تک ظرفیتی (Na+، K+ و غیره) | 0-20 میلی متر | 0-200 میلی متر |
| PO43- | 0- 10 میلی متر | 0- 100 میلی متر |
مصرف و دوز
• اسید نوکلئیک اگزوژن را از محصولات واکسن حذف کنید، خطر سمیت باقیمانده اسید نوکلئیک را کاهش دهید و ایمنی محصول را بهبود بخشید.
• کاهش ویسکوزیته مایع خوراک ناشی از اسید نوکلئیک، کوتاه شدن زمان پردازش و افزایش بازده پروتئین.
• اسید نوکلئیک را که ذره پیچیده شده (ویروس، بدنه و غیره) که مساعد است، بردارید.
برای رهاسازی و خالص سازی ذره.
| نوع آزمایشی | تولید پروتئین | ویروس، واکسن | داروهای سلولی |
| شماره سلول ها | 1 گرم وزن مرطوب سلولی (با بافر 10 میلی لیتری معلق شده است) | تخمیر 1 لیتر مایع رویی | کشت 1 لیتری |
| حداقل دوز | 250U | 100U | 100U |
| دوز توصیه شده | 2500U | 25000U | 5000U |
• تیمار نوکلئاز می تواند وضوح و بازیابی نمونه را برای کروماتوگرافی ستونی، الکتروفورز و آنالیز بلات بهبود بخشد.
• در ژن درمانی، اسید نوکلئیک برای به دست آوردن ویروس های خالص شده مرتبط با آدنو حذف می شود.
