RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
این محصول حاوی بافر واکنش، RT-Anzymes Mix (Bst DNA پلیمراز و ترانس کریپتاز معکوس مقاوم در برابر حرارت)، محافظ لیوفیلیزه و اجزای رنگ کروموژن است.برای استفاده، فقط از بافر استفاده کنید، آنزیم واکنش و آغازگر مخلوط شده و به قالب اضافه می شود.افزودن محافظ لیوفیلیزه می تواند مستقیم باشد.به یک لیوفیلایزر متصل شد و لیوفیلیز شد و فقط پرایمرها و قالب ها در هنگام استفاده اضافه شدند.این کیت تشخیص سریع و واضح بصری تقویت را ارائه می دهد که واکنش منفی با رنگ قرمز و واکنش مثبت با تغییر به زرد نشان داده می شود.
جزء
| جزء | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| بافر تقویت با واسطه حلقه (با رنگ) | 0.96 میلی لیتر | 4.80 میلی لیتر × 2 | 9.60 میلی لیتر × 10 |
| RT-Anzymes Mix | 270 میکرولیتر | 2.70 میلی لیتر | 2.70 میلی لیتر × 10 |
| محافظ لیوفیلیزه | 0.96 میلی لیتر × 2 | 9.60 میلی لیتر × 2 | 9.60 میلی لیتر × 20 |
برنامه های کاربردی
برای تقویت همدما DNA یا RNA.
شرایط نگهداری
حمل و نقل با یخ خشک، ذخیره شده در -25 تا -15 درجه سانتیگراد.از انجماد و ذوب مکرر خودداری کنید، این محصول 12 ماه اعتبار دارد.
پروتکل
1.بافر واکنش را برای استفاده در دمای اتاق ذوب کنید.لوله ها را چند بار ورتکس یا معکوس کنید تا کاملاً مخلوط شوند، سپس سانتریفیوژ کنید تا مایع به انتهای لوله جمع شود.
2.آماده سازی سیستم واکنشاین معرف را می توان در دو سیستم واکنش مخلوط واکنش مایع و مخلوط سیستم لیوفیلیزه تهیه کرد.
1) مخلوط واکنش مایع را آماده کنید
| جزء | جلد |
| بافر تقویت با واسطه حلقه (با رنگ) | 10 میکرولیتر |
| RT-Anzymes Mix | 2.8 میکرولیتر |
| 10× مخلوط پرایمرa | 5 میکرولیتر |
| الگوهای DNA/RNA b | × μL |
| آب بدون هسته | تا 50 میکرولیتر |
2) مخلوط سیستم لیوفیلیزاسیون
① مخلوط لیوفیلیزه را آماده کنید
| جزء | جلد |
| بافر تقویت با واسطه حلقه (با رنگ) | 10 میکرولیتر |
| محافظ لیوفیلیزه | 20 میکرولیتر |
| RT-Anzymes Mix | 2.8 میکرولیتر |
| آب بدون هسته | تا 50 میکرولیتر |
② لیوفیلیزاسیون: مخلوط آماده شده در یک سیستم 50μL لیوفیلیز شد
③ مخلوط واکنش را آماده کنید
| جزء | جلد |
| مخلوط لیوفیلیزه | 1 قطعه |
| 10× مخلوط پرایمرa | 5 میکرولیتر |
| الگوهای DNA/RNA b | × μL |
| آب بدون هسته | تا 50 میکرولیتر |
یادداشت:
1) الف.10× مخلوط پرایمر: 16 میکرومولار FIP/BIP، 2 میکرومولار F3/B3، 4 میکرومولار حلقه F/B؛
2) ب.DEPC (محلول در آب) برای تمپل اسید نوکلئیک توصیه می شود.
1.در دمای 65 درجه سانتی گراد به مدت 30 تا 45 دقیقه انکوبه کنید، که می تواند به طور مناسب با توجه به زمان واکنش تغییر رنگ تمدید شود.
2.با توجه به چشم غیر مسلح رنگ زرد مثبت و قرمز منفی بود.
یادداشت
1.نمک ممکن است در انتهای لوله بافر ظاهر شود، برای مدت کوتاهی ورتکس کنید یا لوله ها را چندین بار معکوس کنید تا کاملاً در دمای اتاق مخلوط شوند.
2.دمای واکنش را می توان با توجه به شرایط پرایمرها بین 62 ℃ تا 68 ℃ بهینه کرد.
3.معرف های بسته بندی شده نباید برای مدت طولانی در معرض هوا قرار گیرند.
4.واکنش تغییر رنگ قرمز و زرد به تغییر pH سیستم واکنش بستگی دارد، لطفا از محلول ذخیره سازی اسید نوکلئیک تریس استفاده نکنید، توصیه می شود از ddH استفاده کنید.2اسید نوکلئیک ذخیره شده O.
5.آزمایش باید استاندارد شود، از جمله آماده سازی سیستم واکنش، لیوفیلیزاسیون، و پردازش نمونه و فرآیند افزودن نمونه.
6.برای جلوگیری از آلودگی، توصیه می شود سیستم واکنش را در یک نیمکت فوق تمیز آماده کنید، در سایر قالب ها را به هود بخار اتاق اضافه کنید تا از تداخل مثبت کاذب جلوگیری شود.
