فسفاتاز قلیایی (ALP)
شرح
آلکالین فسفاتاز از یک سویه نوترکیب E. coli که حامل ژن TAB5 است به دست می آید.این آنزیم دفسفوریلاسیون انتهای 5' و 3' فسفومونواسترهای DNA و RNA را کاتالیز می کند.همچنین، ریبوز و همچنین تری فسفات های دئوکسی ریبونوکلئوزید (NTPs و dNTPs) را هیدرولیز می کند.TAB5 قلیایی فسفاتاز بر روی انتهای 5' بیرون زده، 5' فرورفته و بلانت اثر می کند.فسفاتاز را می توان در بسیاری از کاربردهای زیست شناسی مولکولی، مانند شبیه سازی یا برچسب گذاری انتهای پروب برای حذف انتهای فسفریله DNA یا RNA استفاده کرد.در آزمایشهای شبیهسازی، دفسفوریلاسیون از خود بستن DNA پلاسمید خطی شده جلوگیری میکند.همچنین میتواند dNTPهای ترکیبنشده را در واکنشهای PCR تجزیه کند تا الگویی برای توالییابی DNA آماده کند.آنزیم به طور کامل و غیرقابل برگشت با حرارت دادن در دمای 70 درجه سانتی گراد به مدت 5 دقیقه غیرفعال می شود و در نتیجه حذف فسفاتاز قبل از بستن یا برچسب گذاری پایانی غیر ضروری می شود.
استفاده
1. آلکالین فسفاتاز همراه با پروتئین ها (آنتی بادی ها، استرپتاویدین و غیره) می تواند به طور خاص مولکول های هدف را شناسایی کند و می تواند در ELISA، WB و تشخیص هیستوشیمیایی استفاده شود.
2. آلکالین فسفاتاز را می توان برای فسفر زدایی 5'-پایانه DNA یا RNA برای جلوگیری از خود پیوندی استفاده کرد.
3. DNA یا RNA فسفریله شده فوق را می توان با فسفات های نشاندار شده رادیویی (از طریق پلی نوکلئوتید کیناز T4) نشاندار کرد.
ساختار شیمیایی
مشخصات
موارد تست | مشخصات فنی |
فعالیت آنزیمی | 5U/μL |
فعالیت اندونوکلئاز | تشخیص داده نشد |
فعالیت اگزونوکلئاز | تشخیص داده نشد |
Nicking Activity | تشخیص داده نشد |
فعالیت RNase | تشخیص داده نشد |
E.coli DNA | ≤1کپی/5U |
اندوتوکسین | LAL-Test، ≤10EU/mg |
خلوص | ≥95% |
حمل و نقل و ذخیره سازی
حمل و نقل:محیط
ذخیره سازی :در دمای 8-2 درجه سانتی گراد نگهداری شود
تست مجدد توصیه می شودزندگی:2 سال