یک مرحله ای سریع RT-qPCR Probe Premix-UNG
شماره گربه: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) یک کیت تشخیص سریع RT-qPCR مبتنی بر پروب است که برای PCR کمی تک پلکس یا چندگانه با استفاده از RNA به عنوان الگو (مانند ویروس RNA) مناسب است.این محصول از نسل جدیدی از Taq DNA Polymerase اصلاح شده با آنتی بادی و رونوشت معکوس اختصاصی یک مرحله ای، با بافر بهینه سازی شده برای تقویت سریع استفاده می کند که سرعت تقویت سریعتر، راندمان تقویت و ویژگی بالاتری دارد.از تقویت متعادل در نمونه های تک پلکس و مولتی پلکس با غلظت کم و بالا در مدت زمان کوتاهی پشتیبانی می کند.
اجزاء
1. بافر 5×RT-qPCR (U+)
2. مخلوط آنزیمی (U+)
یادداشت:
آ.بافر 5×RT-qPCR (U+)شامل dNTP و Mg است2+;
بمخلوط آنزیم (U+) شامل رونوشت معکوس، Hot Start Taq DNA polymerase، مهارکننده RNase و UDG است.
جاز نکات بدون RNase، لوله های EP و غیره استفاده کنید.
قبل از استفاده، بافر 5×RT-qPCR (U+) را کاملاً مخلوط کنید.اگر پس از ذوب بارندگی وجود داشت، صبر کنید تا بافر به دمای اتاق برگردد، مخلوط و حل شود و سپس به طور معمول از آنها استفاده کنید.
شرایط نگهداری
این محصول با یخ خشک ارسال می شود و می توان آن را در دمای -25 ~ -15 درجه سانتیگراد به مدت 1 سال نگهداری کرد.
دستورالعمل ها
1. واکنش سیستم
| اجزاء | حجم (20 میکرولیتر واکنش) |
| بافر 2×RT-qPCR | 4 میکرولیتر |
| مخلوط آنزیمی (U+) | 0.8 میکرولیتر |
| پرایمر به جلو | 0.1 ~ 1.0μM |
| پرایمر معکوس | 0.1 ~ 1.0μM |
| کاوشگر TaqMan | 0.05~0.25μM |
| قالب | X μL |
| آب بدون RNase | تا 25 میکرولیتر |
نکات: حجم واکنش 10-50μL است.
2. پروتکل دوچرخه سواری (Sاستاندارد)
| چرخه گام | دما | زمان | چرخه ها |
| رونویسی معکوس | 55 ℃ | 10 دقیقه | 1 |
| دناتوراسیون اولیه | 95 ℃ | 30 ثانیه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 ℃ | 10 ثانیه | 45 |
| بازپخت / گسترش | 60 ℃ | 30 ثانیه |
| پروتکل دوچرخه سواری (سریع) چرخه گام |
دما |
زمان |
چرخه ها |
| رونویسی معکوس | 55 ℃ | 5 دقیقه | 1 |
| دناتوراسیون اولیه | 95 ℃ | 5 ثانیه | 1 |
| دناتوره سازی | 95 ℃ | 3 ثانیه | 43 |
| بازپخت / گسترش | 60 ℃ | 10 ثانیه |
یادداشت:
آ.دمای رونویسی معکوس بین 50 ℃ تا 60 ℃ است، افزایش دما به تقویت ساختارهای پیچیده و الگوهای محتوای CG بالا کمک می کند.
بدمای بهینه بازپخت باید بر اساس مقدار Tm پرایمر تنظیم شود و کوتاه‌ترین زمان برای جمع‌آوری سیگنال فلورسانس بر اساس ابزار Real Time PCR انتخاب شود.
یادداشت
لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، تجهیزات حفاظتی لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
