Multiplex One Step RT-qPCR Premix
شرح
شماره گربه: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix یک کیت PCR کمی چندگانه بر اساس RNA به عنوان الگو است.در آزمایش، رونویسی معکوس و PCR کمی در همان لوله واکنش انجام می شود که عملیات آزمایشی را ساده می کند و خطر آلودگی را کاهش می دهد.طراحی منحصر به فرد مخلوط بافر و آنزیم را می توان در سیستم لیوفیلیزه یک مرحله ای استفاده کرد.این کیت از ترانس کریپتاز معکوس مقاوم در برابر حرارت برای سنتز کارآمد cDNA رشته اول با استفاده از Hotstart Taq DNA Polymerase برای تقویت کمی استفاده می کند.این شامل بافر واکنش بهینه، ترکیب آنزیم‌ها و غیره است و عواملی که به طور موثری تقویت غیر اختصاصی PCR را مهار می‌کنند و راندمان تقویت واکنش‌های qPCR متعدد را افزایش می‌دهند، اضافه شده‌اند، و همزمان با اطمینان از راندمان تقویت پرایمرها، تقویت کمی فلورسانس را ممکن می‌سازد.
اجزاء
| نام |
| 1. لیو بافر |
| 2. مخلوط لیو-آنزیم |
| 3. محافظ لیو |
وضعیت حمل و نقلیون
A: لیو بافر و محافظ: -25 ~ -15 ℃، ماندگاری 1 سال است.
B: مخلوط لیو آنزیم، 2-8 ℃، عمر مفید 6 ماه است.
دستورالعمل عملیات
1. سیستم واکنش (به عنوان مثال 25μL را در نظر بگیرید)
| اجزاء | حجم (μL) | غلظت نهایی |
| لیو بافر | 6 | 1* |
| مخلوط لیو آنزیم | 1 | - |
| Lyo-Protectant | 8 | - |
| مخلوط پرایمر (10μM) | 1 | 0.1- 1uM |
| مخلوط پروب (10μM) | 0.5 | 0.05-0.5uM |
| الگوی RNA | 5 | - |
| DEPC H2O | تا 25 | - |
2. پروتکل دوچرخه سواری بهینه شده
1) پروتکل استاندارد دوچرخه سواری
| مرحله واکنش | درجه حرارت | زمان | چرخه | |
| 1 | رونویسی معکوس | 50 درجه سانتی گرادa | 10 دقیقه | 1 |
| 2 | دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتی گراد | 5 دقیقه | 1 |
| 3 | واکنش تقویت | 95 درجه سانتی گراد | 15 ثانیه | 45 سیکل |
| 60 درجه سانتی گرادb | 30 ثانیهc |
2) پروتکل دوچرخه سواری سریع
|
| مرحله واکنش | درجه حرارت | زمان | چرخه |
| 1 | رونویسی معکوس | 50 درجه سانتی گرادa | 2 دقیقه | 1 |
| 2 | دناتوراسیون اولیه | 95 درجه سانتی گراد | 2 ثانیه | 1 |
| 3 | واکنش تقویت | 95 درجه سانتی گراد | 1 ثانیه |
45 سیکل |
| 60 درجه سانتی گرادb | 13 ثانیهc |
توجه داشته باشید:
a) معکوس رونویسی: دما می تواند 42 درجه سانتیگراد یا 50 درجه سانتیگراد را برای 10-15 دقیقه انتخاب کند.
b) واکنش تقویت: درجه حرارت با توجه به مقدار Tm پرایمرهای طراحی شده تنظیم می شود.
ج)فلورسانس علامت تحصیل: لطفاً رویه آزمایشی را مطابق با الزامات تنظیم کنیددفترچه راهنمای ابزار.
اطلاعات فنی/مشخصات
| شروع داغ | راه اندازی گرم داخلی |
| روش تشخیص | تشخیص پرایمر-کاوشگر |
| روش PCR | RT-qPCR یک مرحله ای |
| نوع نمونه | RNA |
یادداشت
1. این محصول فقط برای استفاده تحقیقاتی است.
2. لطفاً برای اطمینان از سلامت و ایمنی خود، PPE لازم، مانند کت و دستکش آزمایشگاهی را بپوشید!
