BspQI
BspQI را می توان به صورت نوترکیب در E. coli بیان کرد که می تواند مکان های خاصی را تشخیص دهد و تحت تولید قرار می گیرد.
BspQI، یک اندونوکلئاز محدودکننده محدود کننده IIs، از یک سویه E. coli نوترکیب که حامل ژن BspQI کلون شده و اصلاح شده از باسیلوس اسفاریکوس است، مشتق شده است.می تواند مکان های خاصی را تشخیص دهد و توالی تشخیص و مکان های برش به شرح زیر است:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · ·3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
مشخصات محصول
1. فعالیت بالا، هضم سریع.
2. فعالیت کم ستاره، اطمینان از برش دقیق مانند "اسکالپل".
3. بدون BSA و بدون منشاء حیوانی.
حساسیت به متیلاسیون
Dمتیلاسیون هستم:حساس نیست؛
Dمتیلاسیون سانتی متر:حساس نیست؛
متیلاسیون CpG:حساس نیست؛
شرایط نگهداری
محصول باید ≤ 0℃ ارسال شود.در شرایط -25~-15 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
بافر ذخیره سازی
20 میلی‌مولار Tris-HCl، 0.1 میلی‌مولار EDTA، 500 میلی‌مولار KCl، 1.0 میلی‌مولار دی تیوتریتول، 500 میکروگرم در میلی‌لیتر آلبومین نوترکیب، 0. 1٪ Trition X-100 و 50٪ گلیسرول (pH 7.0 @ 25°C).
تعریف واحد
یک واحد به عنوان مقدار آنزیم مورد نیاز برای هضم 1 میکروگرم DNA کنترل داخلی در 1 ساعت در دمای 50 درجه سانتیگراد در حجم کل واکنش 50 میکرولیتر تعریف می شود.
کنترل کیفیت
سنجش خلوص پروتئین (SDS-PAGE):خلوص BspQI ≥95٪ با تجزیه و تحلیل SDS-PAGE تعیین شد.
RNase:10 واحد BspQI با 1.6 میکروگرم MS2 RNA به مدت 4 ساعت در دمای 50 درجه سانتیگراد، همانطور که توسط الکتروفورز ژل آگارز تعیین شد، هیچ تخریبی ایجاد نمی کند.
فعالیت غیر اختصاصی DNase:10U از BspQI با 1μg DNA λ در دمای 50 درجه به مدت 16 ساعت، در مقایسه با 50 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت، DNA اضافی را همانطور که توسط الکتروفورز ژل آگارز تعیین می شود، به دست نمی دهد.
بستن و برش:پس از هضم 1 میکروگرم λDNA با 10U BspQI، قطعات DNA را می توان با T4 DNA لیگاز در دمای 16 درجه سانتی گراد پیوند داد.و این قطعات بسته شده را می توان با BspQI دوباره برش داد.
E. coli DNA: تشخیص qPCR TaqMan اختصاصی rDNA E. coli 16s نشان داد که باقیمانده ژنوم E.coli ≤ 0.1pg/ul است.
باقیمانده پروتئین میزبان:≤ 50 ppm
باکتریایی اندوتوکسین: تست LAL، مطابق با نسخه 2020 فارماکوپه چینی IV، روش تست حد ژل، قانون کلی (1143).محتوای اندوتوکسین باکتریایی باید ≤10 EU/mg باشد.
سیستم و شرایط واکنش
| جزء | جلد |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 میکرولیتر |
| DNA | 1 میکروگرم |
| 10 x BspQ I بافر | 5 میکرولیتر |
| dd H2O | تا 50 میکرولیتر |
شرایط واکنش: 50℃, 1 تا 16 ساعت
غیرفعال سازی حرارت: 80 درجه سانتی گراد به مدت 20 دقیقه.
سیستم و شرایط واکنش توصیه شده می تواند اثر هضم آنزیمی نسبتا خوبی را ارائه دهد، که فقط برای مرجع است، لطفاً برای جزئیات به نتایج تجربی مراجعه کنید.
کاربرد محصول
هضم اندونوکلئاز محدود، شبیه سازی سریع.
یادداشت
1. حجم آنزیم ≤ 1/10 حجم واکنش.
2. فعالیت ستاره ممکن است زمانی رخ دهد که غلظت گلیسرول بیش از 5٪ باشد.
3. فعالیت برش ممکن است زمانی رخ دهد که بستر کمتر از نسبت توصیه شده باشد.
