DNase I
DNase I (دئوکسی ریبونوکلئاز I) یک اندودئوکسی ریبونوکلئاز است که می تواند DNA تک یا دو رشته ای را هضم کند.پیوندهای فسفودی استر را برای تولید مونودئوکسی نوکلئوتیدها یا الیگودئوکسی نوکلئوتیدهای تک یا دو رشته ای با گروه های فسفات در ترمینال 5' و هیدروکسیل در پایانه 3' شناسایی کرده و می شکافد.فعالیت DNase I به Ca2+ بستگی دارد و می تواند توسط یون های فلزی دو ظرفیتی مانند Mn2+ و Zn2+ فعال شود.5 میلی مولار Ca2+ از آنزیم در برابر هیدرولیز محافظت می کند.در حضور Mg2+، آنزیم می‌تواند به‌طور تصادفی هر محل را در هر رشته‌ای از DNA تشخیص دهد و شکاف دهد.در حضور Mn2+، رشته‌های دوتایی DNA را می‌توان به طور همزمان شناسایی کرد و تقریباً در همان محل شکاف داد تا قطعات DNA انتهای صاف یا قطعات DNA انتهایی چسبنده با 1-2 نوکلئوتید بیرون زده را تشکیل دهند.
ویژگی محصول
DNase پانکراس گاوی در سیستم بیان مخمر بیان و خالص شد.
Cاجزاء
| جزء | جلد | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I، بدون RNase | 20 میکرولیتر | 200 میکرولیتر | 1 میلی لیتر | 10 میلی لیتر |
| بافر 10×DNase I | 1 میلی لیتر | 1 میلی لیتر | 5×1 میلی لیتر | 5×10 میلی لیتر |
حمل و نقل و ذخیره سازی
1. ثبات ذخیره سازی: - 15℃~-25℃ برای ذخیره سازی.
2. ثبات حمل و نقل: حمل و نقل زیر کیسه های یخ.
3. عرضه شده در: 10 میلی مولار Tris-HCl، 2 میلی مولار CaCl250% گلیسرول، pH 7.6 در دمای 25 درجه سانتیگراد.
تعریف واحد
یک واحد به عنوان مقدار آنزیمی تعریف می شود که 1 میکروگرم از DNA pBR322 را در 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد به طور کامل تجزیه می کند.
کنترل کیفیت
RNase:5U از DNase I با 1.6 میکروگرم MS2 RNA به مدت 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد، همانطور که توسط الکتروفورز ژل آگارز تعیین شد، هیچ تخریبی ایجاد نمی کند.
باکتریایی اندوتوکسین:تست LAL، مطابق با نسخه 2020 فارماکوپه چینی IV، روش تست حد ژل، قانون کلی (1143).محتوای اندوتوکسین باکتریایی باید ≤10 EU/mg باشد.
دستورالعمل استفاده
1. محلول واکنش را در لوله بدون RNase با توجه به نسبت های ذکر شده در زیر آماده کنید:
| جزء | جلد |
| RNA | X میکروگرم |
| بافر 10 × DNase I | 1 میکرولیتر |
| DNase I، بدون RNase (5U/μL) | 1 U در هر میکروگرم RNA |
| ddH2O | تا 10 میکرولیتر |
2.37 ℃ به مدت 15 دقیقه؛
3. بافر خاتمه را اضافه کنید تا واکنش متوقف شود، و به مدت 10 دقیقه در دمای 65 درجه سانتیگراد حرارت دهید تا DNase I غیرفعال شود. نمونه را می توان مستقیماً برای آزمایش رونویسی بعدی استفاده کرد.
یادداشت
1. از 1U DNase I در هر میکروگرم RNA یا 1U DNase I برای کمتر از 1 میکروگرم RNA استفاده کنید.
2.EDTA باید به غلظت نهایی 5 میلی مولار اضافه شود تا از تجزیه RNA در طول غیرفعال شدن آنزیم محافظت شود.
