2×PCR Master Mix (بدون رنگ)
PCR Master Mix نوعی محلول از پیش مخلوط شده PCR معمولی است که آماده استفاده از جمله Taq DNA Polymerase، dNTP mix MgCl2 و بافر بهینه شده است.در طول واکنش، فقط پرایمر و الگو را می توان برای تقویت اضافه کرد که مراحل عملیات آزمایش را بسیار ساده می کند.این محصول دارای تثبیت کننده های عالی است و به مدت 3 ماه در دمای 4 درجه سانتیگراد قابل نگهداری است.محصول PCR دارای برآمدگی 3'-dA است و به راحتی می توان آن را در وکتور T کلون کرد.
شرایط نگهداری
این محصول باید به مدت دو سال در دمای -25 ~ -15 درجه سانتیگراد نگهداری شود.
مشخصات فنی
| وفاداری (در مقابل طاق) | 1× |
| شروع داغ | No |
| برآمدگی | 3′-A |
| پلیمراز | Taq DNA پلیمراز |
| فرمت واکنش | سوپر میکس یا مستر میکس |
| سرعت واکنش | استاندارد |
| نوع محصول | PCR Master Mix (2×) |
دستورالعمل ها
1.سیستم واکنش
| اجزاء | اندازه (μL) |
| DNA الگو | مناسب |
| پرایمر 1 (10 میکرومول در لیتر) | 2 |
| پرایمر 2 (10 میکرومول در لیتر) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | به 50 |
2.پروتکل تقویت
| مراحل چرخه | دما (درجه سانتیگراد) | زمان | چرخه ها |
| پیش دناتوراسیون | 94 ℃ | 5 دقیقه | 1 |
| دناتوره سازی | 94 ℃ | 30 ثانیه | 35 |
| آنیل کردن | 50-60 ℃ | 30 ثانیه | |
| افزونه | 72 ℃ | 30-60 ثانیه در کیلوبایت | |
| پسوند نهایی | 72 ℃ | 10 دقیقه | 1 |
یادداشت:
1) استفاده از الگو: 50-200 نانوگرم DNA ژنومی.0.1- 10 نانوگرم DNA پلاسمید.
2) Mg2+غلظت: این محصول حاوی 3 میلی مولار MgCl2 مناسب برای اکثر واکنش های PCR می باشد.
3) دمای بازپخت: لطفاً به مقدار نظری Tm پرایمرها مراجعه کنید.دمای بازپخت را می توان 2-5 ℃ کمتر از مقدار تئوری پرایمر تنظیم کرد.
4) زمان گسترش: برای شناسایی مولکولی 30 ثانیه بر کیلوبایت توصیه می شود.برای شبیه سازی ژن، 60sec/kb توصیه می شود.
یادداشت
1.برای ایمنی و سلامتی خود، لطفا از کت های آزمایشگاهی و دستکش های یکبار مصرف برای عمل استفاده کنید.
2.فقط برای استفاده تحقیقاتی!
